维氏气单胞菌TH0426株CpxR/CpxA双组分缺失株的构建及相关生物学特性的分析

来源 :吉林农业大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:zyyafeng621214
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维氏气单胞菌(Aeromonas veronii,A.veronii)是一种可引起人、兽及水生生物共患病原菌,近些年来有关报道不断增加被多个国家将其列为水体质量和食品安全的重点检查对象,国内外有关A.veronii的研究大多集中在分离鉴定和常见毒力因子的检测,而对其致病机制方面的研究鲜有报道,有研究表明,Cpx双组分调控系统广泛存在于革兰氏阴性菌中,并在细菌致病性方面发挥着重要的调控作用,但在A.veronii中的研究尚未见报导,本文通过研究Cpx双组分系统中相关基因的功能,推测其在A.veronii的调控作用,有助于我们进一步了解A.veronii的致病机制。利用基因敲除技术对A.VTH0426 Cpx双组分中的cpxA和cpxR基因进行缺失株与回补株的构建,与野生株相关生物学性状进行对比分析发现,△cpxA和△cpxR与野生株性比,细菌生长状态、溶血性、理化特性及药敏试验无明显变化,在应激耐受实验中,模拟高渗透压及氧化应激结果显示:△cpxA的耐受能力低于△cpxR且二者均显著低于野生株,模拟酸性条件下,△cpxA的耐受能力高于△cpxR但仍低于野生株,模拟碱性条件下,△cpxR的耐受能力高于△cpxA且二者均高于野生株;生物被膜形成能力检测中发现△cpxA与△cpxR随着培养时间的增长生物被膜形成能力与野生株相比,差异逐渐减小;运动能力检测结果显示,野生株的游动直径分别是△cpxA与△cpxR的3.43倍和3.68倍;致病性试验中△cpxA与△cpxR对斑马鱼的LD50升高14.5倍和30.8倍,对小鼠LD50升高6.1倍和11.6倍,与野生株相比△cpxA和△cpxR对EPC细胞黏附和侵袭能力下降1.52倍和2.28倍,对EPC细胞的毒力下降1.97倍和2.89倍。初步完成cpxA与cpxR基因功能的探究。结合双组分中cpxA与cpxR基因功能的研究结果。进行分析表明:Cpx双组分系统参与A.veronii TH0426应激耐受、生物被膜形成和致病性的相关调控。综上所述,我们设想是否可以将Cpx双组分系统看作是一种重要的毒力因子,进一步分析其效应蛋白与宿主细胞之间的相互作用,对阐明Cpx双组分系统复杂的调节机制具有极其重要的作用,为阐明A.veronii的致病机制提供理论上的支持,奠定一些前期研究基础。
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