【摘 要】
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目的:研究单链抗体融合人血白蛋白(HSA-ScFv)在体外对重症肌无力(MG)的治疗作用。方法:将携带有高拷贝重组基因表达载体的毕赤酵母菌GS115菌株复苏后,用YPD培养基传代培养,再
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目的:研究单链抗体融合人血白蛋白(HSA-ScFv)在体外对重症肌无力(MG)的治疗作用。方法:将携带有高拷贝重组基因表达载体的毕赤酵母菌GS115菌株复苏后,用YPD培养基传代培养,再经BMGY、BMMY表达培养基培养3天,每24小时添加100%甲醇使甲醇终浓度为1%诱导表达。培养基上清液室温经14 000 g离心后,利用斑点杂交试验(dot blot)初步判定上清液中的融合蛋白;采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析融合蛋白的分子量;蛋白印迹(western blot)实验进一步确定表达蛋白的特异性;应用竞争性ELISA测定法对HSA-ScFv抑制MG患者血清与人乙酰胆碱受体(AChR)结合率及表达产物稳定性进行测定。结果:HSA-ScFv637对MG患者血清与人AChR结合的抑制率可达77.4%,其对AChR的这种保护能力可持续3天,随着样品的衰变HSA-ScFv637保护作用减弱至消失。结论:HSA-ScFv637在体外能抑制致病性抗AChR抗体与AChR的结合,对AChR具有保护作用。
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