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该文着重观察GM<,3>对J6-2细胞PLC<,γ1>的影响,从而对GM<,3>抑制PLC活性机制进行探讨.目前尚无测定细胞内单一类型PLC活性的特异性方法,但已知PLC <,γ>活化的两个必要条件是磷酸化和由胞浆向质膜转位.该文采用洋地黄皂甙(Digitonin)增加细胞膜渗透性,释放胞液蛋白,通过离心将细胞蛋白分为胞液蛋白和颗粒结合蛋白两部分,然后采用SDS-PAGE,Western blot及酶联免疫显色技术,并结合计算机扫描半定量技术,检测了GM<,3>处理前后PLC<,γ>1在细胞内的转位情况.结果发现:GM<,3>处理组J6-2细胞胞液部分PLC<,γ>1与对照组相比显著增加,而颗粒结合部分PLC<,γ>1则相对减少.这一结果说明,GM<,3>抑制了PLC<,γ>1由胞浆向质膜的转位,提示GM<,3>抑制PLC亚型可能是PLC<,γ>1.PLC在质膜上的定位是发挥其催化作用的必要条件,已知PLC<,γ>1含有PH结构,可借助于PH结构与质膜上的PIP3识别结合,并借以定位于质膜.因此,质膜PIP3的含量是影响PLC<,γ>在质膜定位的重要分子.该文采用无载体<32>P标记细胞质膜膦脂后,用有机溶剂提取,高效薄层层析,放射自显影结合计算机扫描半定量技术,观察了GM<,3>对J6-2细胞PIP3含量的影响.发现GM<,3>处理组细胞PIP3含量明显减少,仅为对照组的10﹪左右,这一结果说明GM<,3>显著抑制PI3K活性,从而使PIP3产生减少.这可能是GM<,3>抑制PLC<,γ>1向质膜转位的重要原因之一.PLC<,γ>主要由活化的生长因子受体激活.生长因子与受体(受体型酪氨酸蛋白激酶)结合使受体二聚体化并自身磷酸化被活化,活化的受体胞内区域形成磷酸化酪氨酸位点.PLC<,γ>可借自身的SH2结构与受体磷酸化位点结合,然后在受体激酶催化下磷酸化被激活.该文进一步观察了GM<,3>对J6-2细胞一些生长因子受体(包括EGFR,INR,PDGFR等)磷酸化的影响.结果表明,GM<,3>显著抑制EGFR的磷酸化,对其它生长因子受体磷酸化无显著影响.综上结果,作者推测GM<,3>抑制J6-2细胞PLC活性至少可能通过两条途径.其一方面可以通过抑制PIP3的生成来抑制PLC<,γ>1的转位,另一方面也可通过抑制EGFR胞内部分酪氨酸磷酸化水平抑制PLC<,γ>1的活化.其结果使DAG水平降低,PKCα活性受到抑制.