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顺铂是最常用、最广谱的抗癌药,不能被其他铂类制剂取代。其副作用中耳毒性表现为双侧不可逆的感音神经性聋,严重影响患者的生活质量,使它的临床应用受到局限。近年研究认为凋亡可能参与了顺铂耳毒性,但确切机制不明。MAPK信号转导通路参与了多种应激诱发的细胞凋亡,MAPK家族中研究较为成熟的有3条通路,即JNK通路、P38通路、ERK通路,JNK和p38通路激活可促进凋亡而ERK激活则抑制凋亡。目前,MAPK信号转导通路在顺铂耳毒性中的作用研究很少报道。 目的 1.给豚鼠腹腔注射顺铂,观察内耳听功能、细胞形态和超微结构变化,确定顺铂耳毒性,了解凋亡在顺铂耳毒性中的作用。 2.初步探讨MAPK信号转导通路中JNK/cjun、p38和ERK在顺铂耳毒性中的作用。 方法 1.选健康豚鼠40只,随机分为两组,每组20只,实验组给豚鼠腹腔注射顺铂,4mg/kg/d,连续4天,对照组每天给等量生理盐水。最后一次给药后24小时内处死动物、取材,分别多聚甲醛、戊二醛固定或快速液氮冻存,均取左侧耳蜗。 2.所有动物给药前和处死前均检测听性脑干反应(ABR)反应阈,光镜下对H-E染色的切片和扫描电镜下对内耳细胞进行形态学评价。 3.TUNEL法和透射电镜相结合,检测耳蜗组织内凋亡的表达。 4.免疫组化法鉴定实验组和对照组内耳cjun蛋白的表达,RT-PCR法半定量检测cjun基因表达,取耳蜗组织,提取总RNA,反转录成cDNA后扩增,最终扩增产物与内参照β-actin的灰度比值代表组织的cjun mRNA水平。 5.免疫组化法鉴定pERK1/2和pp38在顺铂组和对照组的表达。