本文分三部分对水貂犬瘟热病毒的分离鉴定及其F基因的原核表达进行了研究： 1.取一发病水貂的肝、脾、脑等组织研磨后用Vero和BHK细胞分离病毒，2-3代后细胞产生了明显的CPE，电镜检查发现了典型的副粘病毒样粒子，大小约150nm。IFA试验和RT-PCR检测均为阳性，证明分离毒是一株犬瘟热病毒。进一步研究显示：该毒株的TCID50为10-4.87，对鹅、鸡、小鼠、家兔、山羊、猪红细胞均无凝集性。分离株病毒对乙醚、氯仿敏感，不耐酸、不耐热，病毒的核酸型为RNA。将PCR得到的部分F基因克隆到pMD18-T载体上进行测序，将其与疫苗株Onderstepoort、国外水貂分离株1493-89进行序列比较。 2.用试验一的针对CDV的F基因保守区设计的引物F、R，分别以阳性长春株和水貂分离株的RNA为模板，建立了Real-timePCR方法来检测CDV，确定特异性产物的Tm值。 3.以从水貂分离株中提取的RNA为模板，经RT-PCR扩增获得一约1000bp的F基因片段。将此片段插入到pET-32a质粒中，构建了重组质粒pET-32a-F，重组质粒经PCR和酶切鉴定为阳性后，转化E.coliBL21(DE3)中，经1.0mMIPTG在30℃的条件下诱导，目的基因获得了高效表达。SDS-PAGE电泳显示表达产物分子量约为55KD，大小与预期相符；WesternBlotting试验进一步证实，该基因获得了正确表达。使用His-BindResins纯化系统对表达产物进行纯化，得到了较纯的目的蛋白。