增强子(Enhancer)13q-Enh2位于13q12.12肺癌风险染色质区，实验室前期已从不同角度证实，TNFRSF19为增强子13q-Enh2的靶基因，在正常支气管上皮细胞中敲除增强子13q-Enh2，显著下调TNFRSF19基因表达，提高经NNK诱导细胞的恶性转化率。TNFRSF19(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 19)主要表达于正常人气道上皮，生物学功能尚不明确，有限报道显示它在不同肿瘤中的具有不同的功能。TNFRSF19与肺癌的功能联系尚未见研究报道。本课题的目的是在前期结果基础上，初步探究TNFRSF19在肺癌发生发展中的作用及机制。
　　为了探究TNFRSF19在肺癌发生发展中的功能，我们首先通过细胞三维培养(3D culture)实验分析，比较观察敲除13q-Enh2对细胞在NNK处理条件下成球能力的变化，发现13q-Enh2-/-的克隆C5和C23的成球能力显著高于对照细胞；而在C5和C23克隆中恢复13q-Enh2的靶基因TNFRSF19的表达，可逆转上述表型，提示在正常肺支气管上皮中，TNFRSF19能够发挥抑制NNK诱导细胞转化的功能。接着，我们通过构建慢病毒过表达TNFRSF19质粒并转染TNFRSF19低表达的A549肺癌细胞，进一步观察TNFRSF19对肺癌细胞表型影响，发现过表达TNFRSF19后，细胞的增殖、侵袭、锚定非依赖生长能力均受到抑制，说明TNFRSF19在细胞肺癌中具有能抑制恶性表型的功能。接下来，我们在117例肺癌病例中检测了TNFRSF19的表达，发现癌组织(Tumor)中TNFRSF19的表达明显低于癌旁组织(Adjacent normal tissue)。并且发现肺癌组织(Tumor)中TNFRSF19表达的降低伴随着T分期，N分期，TNM分期总分期I,II,III,IV期的增加。说明TNFRSF19的高表达对于肿瘤浸润程度，淋巴结转移，及癌组织总分期存在抑制作用。Kaplan-Meier生存分析数据库中也提示TNFRSF19的低表达预示着不良预后。以上临床数据及分子实验结果均提示着TNFRSF19在临床中对于肺癌发生发展存在着一定保护作用。TNFRSF19在肺癌中的保护性作用有可能运用于临床。
　　Wnt/β-catenin信号通路异常激活与包括肺癌在内的多种恶性肿瘤的发生发展相关。通过String数据库预测蛋白之间的相互作用，我们发现与TNFRSF19存在密切相互作用的蛋白为Wnt3a。Wnt3a作为Wnt/β-catenin信号通路中重要的组成部分,能够激活Wnt/β-catenin信号通路；并且已有报道显示，在胃癌组织中TNFRSF19能够抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活。因此我们推测,TNFRSF19能够通过抑制Wnt/β-catenin信号通路抑制细胞肺癌恶性表型。为验证这一推测，我们首先通过Westernblot实验检测在肺癌中过表达TNFRSF19能否有效抑制β-catenin入核。实验结果显示，过表达TNFRSF19后β-catenin的入核减少，说明在肺癌细胞中TNFRSF19能负调控Wnt/β-catenin信号通路。使用Wnt/β-catenin信号通路抑制剂后，A549细胞的增殖、侵袭、成球能力均下降，与过表达TNFRSF19后的表型一致。这些结果与我们的临床样本分析结果一致，提示TNFRSF19能够通过负调控Wnt/β-catenin信号通路抑制肺癌细胞的恶性表型。
　　我们的研究结果提示，TNFRSF19抑制支气管上皮细胞恶性转化及肺癌细胞恶性表型中发挥重要作用，是一个潜在的抑癌基因,值得深入研究。