【摘 要】
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在以褐藻酸钠为唯一碳源的液体培养基上,经多次富集和驯化,从腐败羊栖菜的微生物种群中筛选到一株具有专一水解褐藻胶的裂解酶产生菌株X8。经生理生化特征和16S rDNA鉴定,其
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在以褐藻酸钠为唯一碳源的液体培养基上,经多次富集和驯化,从腐败羊栖菜的微生物种群中筛选到一株具有专一水解褐藻胶的裂解酶产生菌株X8。经生理生化特征和16S rDNA鉴定,其为琼氏不动杆菌株。通过单因素和正交实验,确定褐藻酸降解菌株X8的优化产酶培养基配方(w/v)为:0.6%褐藻酸钠、0.7%蛋白胨、1.5%氯化钠、0.3%K2HPO4·3H2O。较优发酵产酶条件为:初始pH 7.0,25℃,培养时间16h,摇瓶装量50 mL/250 mL三角瓶。优化后的发酵液菌体胞内酶活力达157.32 U/mL,同比发酵优化前的酶活力提高到2.59倍。菌株X8在优化后的发酵培养基中25℃培养16 h后,经离心、硫酸铵盐析分级沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow和Sephacry S-100凝胶层析,对褐藻酸酶进行了分离纯化,该酶的最终回收率为22.74%,酶富集5.17倍。通过褐藻胶裂解酶的基本酶学特性研究表明:该酶的最适反应温度和pH分别为30℃、8.8,且该条件下酶反应动力学常数Km和Vmax分别为6.68 mg/min和960.89μg/mL/min。经40℃、30 min热稳定性和4℃、5 d的贮藏稳定性研究表明,该酶残存酶活力均在90%以上。研究同时表明:该酶的最适稳定pH范围为6.9-9.8。不同金属离子对酶活影响不同,Mg2+、K+对该酶活力有较明显催化作用,而Mn2+、Ca2+、Fe2+、Cu2+、Zn2+和Pb2+均对酶活有不同程度的抑制作用,其中Cu2+、Zn2+和Pb2+可完全抑制该酶的活性。
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