草鱼鱼鳞胶原蛋白与角蛋白的分离纯化及鉴定

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草鱼鱼鳞含有丰富的胶原蛋白和角蛋白,具有重要的经济价值。本文以新鲜草鱼鱼鳞为原料,对其基本成分进行分析,采用单因素和正交试验设计对其预处理及胶原蛋白与角蛋白的提取工艺进行优化,并对提取的胶原蛋白和角蛋白进行鉴定,结果表明:1)新鲜草鱼鱼鳞(湿基)中水分含量为59.280%,总蛋白含量为25.360%,脂肪含量为0.240%,总灰分含量为15.120%,共检测出17种氨基酸,总量为28.531g/100g。预处理最优工艺为在4℃条件下采用10%的NaCl溶液浸泡12h脱除杂蛋白,再采用0.1mol/L的NaOH溶液浸泡12h脱除脂肪,然后用1%的H202溶液浸泡12h脱除色素,最后用4%的柠檬酸溶液以1:14的料液比浸泡6h脱除灰分。2)草鱼鱼鳞胶原蛋白与角蛋白分离纯化的方法为:首先采用柠檬酸在4℃下提取酸溶性胶原蛋白,残渣再以胃蛋白酶在4℃下提取酶溶性胶原蛋白,胶原蛋白的提取液采用盐析沉淀后透析的方法进行纯化。提取酶溶性胶原蛋白后的残渣采用碱法提取角蛋白,角蛋白提取液采用等电点沉淀后透析的方法进行纯化。3)草鱼鱼鳞酸溶性胶原蛋白提取的最优工艺为柠檬酸浓度0.2mol/L,提取时间24h,料液比1:17.5,此条件下酸溶性胶原蛋白的得率为6.410%。草鱼鱼鳞酶溶性胶原蛋白提取的最优工艺为胃蛋白酶浓度2.5%,料液比1:10,提取时间28h,此条件下酶溶性胶原蛋白的得率为10.210%。草鱼鱼鳞角蛋白提取的最优工艺为氢氧化钠浓度9%,料液比1:12.5,提取温度60℃。4)草鱼鱼鳞酸溶性胶原蛋白和酶溶性胶原蛋白的紫外图谱分别在227.0nm和225.2nm处出现了一个强吸收峰,符合Ⅰ型胶原蛋白的紫外图谱特征;其三螺旋结构结构保存完整,相对分子质量在300KD以上;氨基酸组成与Ⅰ型胶原蛋白的氨基酸组成相符,没有检测出胱氨酸,酪氨酸的含量较少,其中脯氨酸含量比Ⅰ型胶原低20%左右。草鱼鱼鳞角蛋白的紫外吸收峰位置出现在218.2nm和280.4nm处,其分子量在48KD左右,二级结构属于α-螺旋结构,肽键没有被破坏,氨基酸组成与羊毛角蛋白的氨基酸组成相符,含有较多的胱氨酸。
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