轮状病毒(Rotavirus)属于呼肠病毒科(Reoviridae)轮状病毒属(Rotavirus),是一个直径约为70nm、无包膜、具有三层衣壳的RNA病毒。1973年,发现RV是引起婴幼儿非细菌性肠胃炎的主要病原体。目前每年全球约有600,000儿童死于RV感染所导致的重症腹泻。RV基因组包含11个分节段的双链RNA,编码6个结构蛋白和6个非结构蛋白。根据结构蛋白VP6的抗原性差异,可将轮状病毒分为A-G 7个组,其中,A组RV是引起婴幼儿腹泻的主要病原。A组RV结构蛋白VP4位于RV的最外层,呈针状样分布,锚定于中间层的VP6上,是RV主要的交叉中和抗原。VP4蛋白在消化道被胰蛋白酶裂解为VP5*和VP8*两个片段并增强RV颗粒的的感染性。为了深入了解VP5*和VP8*的重组表达及其免疫学性质,本研究克隆了A组人RV TB-Chen株VP5*和VP8*全基因,构建了重组表达质粒pET-VP5*和pET-VP8*,并在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达了重组蛋白VP5*和VP8* (rVP5*和rVP8*).研究结果表明,rVP5*和rVP8*表达量分别占菌体总蛋白量的32%和41%,这两种蛋白在大肠杆菌中都得到了高效表达。利用纯化的rVP5*或rVP8*免疫豚鼠,能够诱发豚鼠产生抗rVP5*或rVP8*特异性血清抗体。Western blot和免疫荧光检测表明所得抗体不仅能与该rVP5*或rVP8*蛋白发生特异性反应,而且可以与SA1l株或Wa株RV感染的MA104细胞中表达的病毒VP4发生反应。研究结果还表明,在菌体细胞中表达的VP4以包涵体形式存在,充满了整个菌体；SA11株或Wa株RV感染的MA104细胞中表达的病毒VP4在病毒感染6h时就能检测到,并且主要以毒质体形式存在于细胞质内,在细胞核周围有密集分布。以上研究结果为进一步研究VP5*和VP8*蛋白的结构、功能、免疫学性质及其开发应用奠定了很好的基础。