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利用地高辛标记的旋毛虫新生幼虫期特异性核酸探T68对旋毛虫新生幼虫cDNA文库进行筛选，获得1个全长为1609 bp的cDNA分子。该cDNA含有1个1395bp的开放阅读框架（ORF），该ORF编码1个465个氨基酸残基组成的多肽，其分子量理论推导值为50.1kDa，等电点（IP）为9.7。蛋白质序列分析显示，31～64位氨基酸为信号肽序列，N末端前31～64个氨基酸以疏水性为主，而其亲水性区域位于C末端。Blastn同源性分析表明，与其他已知生物基因序列无明显的同源性，为1个新的cDNA分子，命名为：T668，GenBank注册号为：AF331160.1。Blastp蛋白质同源性分析表明，T668与丝氨酸蛋白酶（U62659）同源性达38％。同时，从cDNA文库筛选获得1个克隆G10-7，编码此蛋白C-末端275个氨基酸残基。应用PCR技术，从筛选得到的pBK-CMV-G10-7和pBK-CMV-T668重组质粒中分别扩增到G10-7和不含信号肽序列的T668基因片段，与pMD18-T载体连接后进行克隆，再将其分别克隆于原核表达载体pET28，成功地构建了pETG10-7、pETT668重组表达质粒，将其转化到E.coli表达菌株BL21（DE3）感受态细胞中，经IPTG诱导表达。SDS-PAGE结果表明，G10-7和T668表达融合蛋白的分子量分别为34kDa和49kDa。薄层扫描结果显示，随诱导时间的延长蛋白表达量逐渐增加，在分别诱导4、5h时，表达量达到高峰，目的蛋白分别占菌体总蛋白的61.7％和34.6％。Western-blotting检测显示，两种蛋白均可被感染旋毛虫阳性猪血清所识别，表明两种蛋白均具有良好的反应原性，为旋毛虫病的早期诊断及防制提供了新的潜在抗原。 为了研究重组蛋白对旋毛虫病诊断的特异性、敏感性及其免疫保护性，以重组蛋白为抗原，并以排泄／分泌（ES）抗原作为检测对照，以兔抗旋毛虫血清、猪抗旋毛虫血清及人抗旋毛虫血清为一抗，分别以辣根过氧化物酶（HRP）标记的山羊抗兔IgG、羊抗猪IgG和山羊抗人IgG为二抗，建立了检测兔、猪和人旋毛虫抗体的间接ELISA方法。结果表明，以G10-7、T668重组蛋白为抗原诊断旋毛虫病，敏感性强、检出率高，且与ES抗原检测结果完全一致。可见，重组抗原有望代替ES抗原，且G10-7重组抗原可以代替T668重组抗原诊断旋毛虫病。以T668、G10-7 重组蛋白为抗原免疫小鼠，每间隔1周免疫1次，共免疫3次。末次免疫后1周， 每只小鼠攻击感染200条旋毛虫感染性肌幼虫（ML），感染后5周用消化法检查ML 负荷。同时，用 ELISA方法检测攻击感染后 1～5周血清中抗 NBL IgG滴度。结果 表明，T668、G10－7重组蛋白免疫组 ML减虫率分别为 67．0％和 63．3％，明显高于 仅用佐剂组（5．4％和 5．8％）；血清中抗重组抗原哈G滴度也明显升高。可见，T668、 G10－7重组蛋白均能诱导小鼠产生特异性体液免疫及免疫保护，有望成为旋毛虫基 因工程疫苗的侯选抗原。 在原核表达的基础上，依据Te、G10－7基因序列设计引物，分别以 pBK－CMVT668和 PBK－CWG10－7为模板，扩增出m－7和含有信号肽的 T668目 的片段，将其分别克隆于真核表达载体 PCR3．1，构建 pCRG－7和 pCRT668真核表 达载体。经脂质体转染于COS－7细胞，经培养后，分别取不同时段的COS。7细胞裂 解物和培养物上清，ELISA检测其表达蛋白的反应原性。结果表明，pCRG10－7和 pCRT668重组质粒在COS－7细胞中的瞬时表达产物均具有良好的反应性。从而为旋 毛虫核酸疫苗的研制奠定了实验基础。