基因治疗作为现代医学和分子生物学结合而诞生的新技术，已成为治疗癌症和遗传性疾病的新手段。基因治疗常需要借助载体将外源基因导入生物细胞内，现今常用的基因治疗载体包括慢病毒（lentivirus，LV），腺病毒（adenovirus，Ad），反转录病毒（retrovirus，RV）及腺相关病毒（adeno-associated virus，AAV）等。腺相关病毒（adeno-associated virus，AAV）属于细小家族病毒的一员，目前分离得到的AAV的血清型超过100种。常用的血清型有9种，各种亚型在组织感染过程中存在特异性。相比于其它基因治疗载体，AAV具有许多的优势，首先，AAV的免疫源性低，在人体内不具备致病性；其次，AAV可以有效地转导细胞，其介导转基因表达可达数年之久；再次，不同血清型的AAV的组织趋性有所不同。这些优点使得AAV成为目前最接近理想载体的病毒。在过去的几年里，重组腺相关病毒（rAAV）作为基因载体，在转导肝脏，心脏及视网膜等方面取得到了可观的成果。然而，AAV的宿主较广泛，使其对组织和细胞的靶向能力较差，因而通过基因工程的手段改造AAV病毒，来提高它对目的细胞的靶向能力和感染效率，是现阶段的研究关键。AAV cap基因编码产生的衣壳蛋白，通过识别细胞表面的特异性受体而与细胞发生相互作用。因此，AAV衣壳蛋白决定了病毒的靶向性。目前，人们在构建靶向性AAV载体上已取得了一系列的进展。蛋白的定向进化技术已经为AAV衣壳的改造提供了良好的技术基础，通过定向进化可以产生高多样性的衣壳文库，经过体外或体内筛选，可以将某种特性增强的新型病毒变异体分离出来。DNA shuffling是一种体外同源重组技术。该技术通过对单个基因，或来源不同但功能相近的同源基因的核酸序列进行改造，创造出新基因，同时其表达产物亦具备新功能。DNA shuffling技术已在体外进化蛋白领域得到了广泛地应用。本实验采用家族DNA shuffling技术，将AAV1~AAV9（除AAV5）种血清型的cap基因进行改造。通过PCR扩增各种亲本型AAV cap基因，随机酶切得到大小不一的DNA片段，回收100-2000bp大小的片段，采用无引物PCR和有引物PCR法重组DNA片段得到全长cap基因，该cap基因为各种血清型片段的嵌合体。将嵌合型cap基因与载体pAdBII连接构建质粒文库，以此构建MC-AAV病毒库。经过5轮的体外筛选，我们获得了能够有效感染卵巢癌细胞SK-OV-3f的新型病毒qAAV，基因序列对比分析揭示了这种嵌合型AAV病毒的衣壳是AAV1，AAV2，AAV3和AAV8的嵌合体。我们研究了筛选出的qAAV的感染能力，以亲本型AAV作为对照，同等病毒MOI的情况下，qAAV感染卵巢癌细胞SK-OV-3f的能力明显高于亲本型病毒；以同MOI qAAV病毒分别感染肝癌细胞、肺癌细胞和胃癌细胞，结果显示，其对这两种细胞几乎没有感染能力，证明了该种qAAV对目的细胞具有一定的靶向性。该研究所建立的嵌合AAV病毒库，为筛选靶向病毒以及进一步改造AAV载体打下了坚实的基础。