牛支原体(Mycoplasma bovis, M. bovis)感染能够引起牛的肺炎、关节炎、结膜炎及乳房炎等疾病，常与其他疾病混合感染，导致病情复杂化不易治愈，是危害我国养牛业的重要因素之一。M.bovis表面有丰富的脂质相关膜蛋白(lipid-associated membrane proteins, LAMPs)能够介导支原体黏附感染宿主，通过与细胞膜表面受体结合，激发宿主细胞释放细胞因子来调节宿主的免疫系统。为探究宿主TRIM9和SEMA7A基因在牛支原体(Mycoplasma bovis, M. bovis)脂质相关膜蛋白(LAMPs)引起宿主天然免疫应答机制中的作用，开展了TRIM9和SEMA7A基因与M.bovisLAMPs刺激胎牛肺(EBL)细胞释放致炎细胞因子IL-1β相关机制研究，前期研究发现LAMPs能够通过NF-κB信号通路诱导EBL细胞释放IL-1β，但宿主细胞中参与这条信号通路的相关基因尚不明确。本实验室通过转录组学研究发现LAMPs诱导EBL细胞可上调表达TRIM9基因和SEMA7A基因，而相关文献报道TRIM9基因与NF-κB信号通路相关，SEMA7A基因与免疫反应密切相关。本研究通过荧光定量PCR(qPCR)方法验证了M.bovisLAMPs刺激EBL细胞后可以引起细胞中TRIM9基因和SEMA7A基因上调表达。利用构建的pEGFP-C1-TRIM9和pEGFP-C1-SEMA7A荧光报告质粒证明TRIM9蛋白和SEMA7A蛋白皆能瞬时表达于EBL细胞浆中。通过将构建的pCMV-C-HA-TRIM9重组质粒和si-TRIM9干扰质粒转染EBL细胞，经2μg/mL牛支原体LAMPs刺激12h后，qPCR和ELISA分别检测IL-1β表达情况，结果显示，与M.bovisLAMPs刺激正常EBL细胞组相比，过表达TRIM9组中IL-1β在转录水平和蛋白表达水平上无明显变化，而敲低TRIM9组中IL-1β显著上调(分别上调33倍和30倍)。同时利用Westernblot检测p65蛋白磷酸化水平，分析NF-κB信号通路激活情况，结果显示，与M.bovisLAMPs刺激正常EBL细胞组相比，TRIM9蛋白过表达组NF-κB信号通路激活水平无明显变化，而敲低TRIM9组p65磷酸化水平提高，促进NF-κB信号通路激活。同样通过将构建的pCMV-HA-C-SEMA7A重组质粒和si-SEMA7A干扰RNA转染EBL细胞，经2μg/mL牛支原体LAMPs刺激12h后，qPCR和ELISA分别检测IL-1β表达情况，结果显示，过表达SEMA7A组中IL-1β在转录水平和蛋白表达水平上分别上调15.6倍和16倍，敲低SEMA7A组中IL-1β分别下调0.7倍和0.8倍。同时利用Westernblot检测p65蛋白磷酸化水平，分析NF-κB信号通路激活情况，结果显示，与M.bovisLAMPs刺激正常EBL细胞组相比，SEMA7A蛋白过表达组和敲低组p65磷酸化水平均无明显变化。综上结果表明敲低TRIM9基因能够促进M.bovisLAMPs通过NF-κB信号通路诱导EBL细胞释放IL-1β，SEMA7A基因能够正向调控EBL细胞表达IL-1β，但其通过何种信号通路调控IL-1β有待进一步研究。本研究为进一步明确宿主基因参与抗牛支原体天然免疫应答的机制奠定基础。