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背景和目的随着生活水平的提高,非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)已成为全球主要慢性肝病之一。NAFLD患者常伴有肥胖、代谢综合征、2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)、心血管疾病等,其主要死因是心血管疾病和代谢综合征相关肿瘤。相对非酒精性单纯性脂肪性肝病(nonalcoholic simple fatty liver,NAFL)患者来说,非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic simple fat hepatitis,NASH)患者心血管疾病的患病率更高。另一方面,更有学者提出NAFLD是代谢综合征在肝脏的表现,代谢综合征和T2DM是NAFLD的两大主要危险要素。人们普遍认为不健康的生活方式易导致肥胖和NAFLD,这与不良的饮食和作息习惯等各种环境要素引起的肠道菌群紊乱有关。愈来愈多的相关研究通过分析NAFLD患者的粪便发现了肠道菌群结构紊乱。此外,胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)和炎症也常与上述疾病共存。有学者认为以IR起始的“二次打击”学说是NAFLD的主要发病机制,最终导致机体呈慢性炎症状态[1]。愈来愈多的研究证实,部分肠道菌群具有抗炎和抗IR的作用。但限于样本容量及个体异质性,尚未有明确一致的结论。因此,本研究通过采集NAFLD组、NAFLD合并T2DM组、健康组对象的血清和粪便标本,进行各临床生化指标检测和肠道菌群16S r DNA高通量illumina测序,并探讨NAFLD患者肠道菌群结构与生化指标改变的相关性,为NAFLD的临床诊断和防治提供依据。对象和方法收集NAFLD患者48例、NAFLD合并T2DM患者40例、体检健康者30例分别组成NAFLD组、NAFLD合并T2DM组、健康组。全部研究对象入组后由指定人员测量身高、体重、腰围等基本指标,并计算BMI。留取5ml清晨空腹静脉血,用全自动生化分析仪检测各组患者的血清FG,UA,TBIL,ALT,AST,TG,TC,HDL,LDL水平,ELISA测定全部研究对象血清中TNF-α水平以及FIns水平并计算HOMA-IR值。收集每位研究对象的新鲜粪便标本约1g,抽提DNA并利用琼脂糖凝胶电泳技术检测DNA纯度,PCR扩增后采用16S r DNA高通量illumina测序技术进行肠道菌群多样性测序,通过比较优化序列区分样本后进行OTU聚类分析和物种分类学分析。结果1.临床生化指标分析显示:NAFLD组BMI、AST、TG、TC、LDL、UA、TNF-α、FIns、HOMA-IR水平均高于健康组,HDL水平低于健康组,差异有统计学意义(P<0.05)。NAFLD合并T2DM组与NAFLD组比较,年龄、FG、HOMA-IR水平升高,BMI、AST、TC、HDL水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。2.肠道菌群多样性分析显示:与健康组比较,NAFLD组患者肠道菌群Alpha多样性减少和Firmicutes门丰度降低。在“属(Genus)”水平上表现为Firmicutes门中Roseburia属和Subdoligranulum属细菌丰度降低,差异有统计学意义(P<0.05)。在“门(Phylum)”水平,NAFLD合并T2DM组与NAFLD组肠道菌群结构的差异无统计学意义(P<0.05),但其较健康组Firmicutes门丰度降低、Bacteroidetes门丰度升高。在“属(Genus)”的水平上表现为NAFLD合并T2DM组Firmicutes门中Faecalibacterium属、Blautia属和Roseburia属的丰度均低于NAFLD组和健康组。3.基于“属(Genus)”的水平,采用spearman相关分析显示:Fusicatenibacter、Blautia、Anaerostipes、Faecalibacterium、Roseburia均与FG、HOMA-IR水平负相关(r<0,P<0.05),与HDL水平正相关(r>0,P<0.05);Fusicatenibacter与TNF-α水平负相关(r<0,P<0.05);Lachnoclostridium与BMI、ALT、AST水平正相关(r>0,P<0.05);Fusobacterium与AST水平正相关(r>0,P<0.05);Escherichia-shigella与FG、LDL、ALT、AST水平正相关(r>0,P<0.05)。结论1.NAFLD患者与NAFLD合并T2DM患者均存在慢性低度炎症和胰岛素抵抗,并伴有肥胖、高脂血症和肝功能损伤。2.NAFLD患者存在肠道菌群结构紊乱,具体表现为Alpha多样性减少和Firmicutes门丰度降低。在“属(Genus)”水平,Roseburia属和Subdoligranulum属丰度降低。包含Fusicatenibacter、Blautia、Anaerostipes、Faecalibacterium、Roseburia、Lachnospiraceae等在内的部分菌属与炎症和胰岛素抵抗有关。3.NAFLD与肠道菌群和各环境因子间是相互影响的,通过调节肠道菌群改善IR和炎症反应可能作为防治NAFLD的新“靶点”。