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背景:少突胶质细胞前体细胞(Oligodendrocyte Precursor Cells,OPCs)存在于中枢神经系统(Central Nervous System,CNS)中,具有迁移、增殖及分化为成熟少突胶质细胞(Oligodendrocytes,OLs)并形成髓鞘结构的能力;脱髓鞘相关疾病是以髓鞘缺失为主要特征的一类神经系统疾病,如:脊髓损伤(Spinal Cord Injury,SCI)、多发性硬化(Multiple Sclerosis,MS)、脑白质损伤(White Matter Injury,WMI)等,OPCs被认为是移植治疗脑脱髓鞘及脱髓鞘相关疾病疾病最具潜力的细胞。人OPCs有效的冷冻保存有助于对其开展基础乃至临床转化研究,但人源OPC的冷冻保存一直存在研究体系不完整的关键问题。目的:通过探究优化冻存过程中的不同影响因素,开发针对人胎脑神经干细胞来源OPCs的冻存方法。方法:贴壁培养人胎脑神经干细胞来源的OPCs,比较使用消化和机械吹打两种方法收集细胞冻存前活率。择优后通过探究:冻存密度(0.5-3.5×106/mL)、不同冻存液(7种冻存液)、冻存速率(冻存盒慢速降温和液氮气相快速降温)、以及冷冻保存时间(长-短期储存)4个因素冻存复苏后台盼蓝染色细胞活率的影响。在优选后的冻方案基础上,复苏后培养7天通过细胞免疫荧光染色法,流式细胞术检测OPCs特异性标志物PDGFR-α、A2B5、NG2表达情况,使用细胞免疫荧光染色法检测增殖相关Ki67抗原表达,CCK8增殖实验,Transwll迁移实验,单细胞全转录组测序实验分析冻存复苏对人OPCs特性和功能影响。结果:使用消化法收集人OPCs明显提高冻存前细胞活率;冻存浓密在0.5-3.5×106/mL范围内,密度升高,复苏活率逐渐提高;快速降温4组复苏活率均低于30%且无法继续贴壁培养,慢速降温4组复苏活率均较高。最终选定使用消化法收集细胞,2×106/mL冻存密度,使用含海藻糖的冻存液G,慢速降温冻存为优选冻存人OPCs方案,复苏活率最高,可达(75.73±6.66)%;储存半年内不影响复苏活率,冻存前后OPCs特异性标记物PDGFR-α、A2B5、NG2表达无差异;细胞增殖、迁移能力及相关基因表达无差异;冻存复苏后保留分化潜能。结论:采用消化法收集人OPCs,使用含海藻糖的冻存液G慢冻快融的方法,能得到较高复苏活率,适用于人胎脑神经干细胞诱导OPCs冷冻保存,复苏后不影响细胞功能和标志物表达。