论文部分内容阅读
乙型肝炎病毒(HepatitisBvirus,HBV)是全世界最普遍也是最严重的传染病之一。HBV是肝病毒科的成员之一,全基因组长度为3.2kb的部分双链结构,它包含四个开放的阅读框:S,C,P,X。其中P和X分别编码对病毒复制至关重要的蛋白,Polymerase和HBx。其中Polymerase在以负链为模板延伸正链并进行修复形成cccDNA的过程中起到了重要作用。而HBx是一个多功能的调节蛋白,与肝癌的发生紧密相关。HBx的功能主要涉及到转录,蛋白质降解,信号传导,细胞增殖,细胞周期,衰老,自噬和凋亡等。
为了能获得在体内研究HBV的致病机制及其活体的相关免疫机制,我们建立了HBV的果蝇模型,在这个模型里对HBV的靶蛋白HBx和Polymerase进行了过表达。首先,我们克隆了HBx和Polymerase的全序列,并连接到果蝇专用显微注射载体pUAST中。然后,我们利用显微注射技术获得了转基因果蝇。之后,我们把转基因果蝇与相应的GAL4果蝇杂交使HBx和Polymerase基因过表达,并观察相应的表型。在本实验中,在过表达了HBx和Polymerase后,过表达果蝇的眼睛比野生型果蝇的眼睛要更大。相应的,我们在建立过表达稳定遗传株的时候观察到纯合型的果蝇在蛹期有较高的死亡率。而稳定过量表达株在与凋亡果蝇GMR-rpr-TM6B,Tb杂交后发觉后代的眼睛比起亲本的要变小,是以HBx和Polymerase可能对Rpr相关的途径有促凋亡作用。