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转基因内皮细胞在小口径人工血管上种植及表达的体外实验研究 小口径人工血管内皮化的研究已有二十余年,但至今仍没有真正意义上的临床应用,主要原因在于种有EC的小口径人工血管植入早期只是部分内皮化,其血管内壁并没形成一层完整的EC层,所以早期易形成血栓而造成血管堵塞。我们认为这种早期血栓形成的原因与EC本身的生物活性,EC的种植方法和植入早期的抗凝治疗有关。本研究总结过去经验,从细胞水平研究EC的种植过程,对适合于种植用的EC进行了较全面系统地研究,首次提出了“加压旋转种植法”,还首次用腺病毒做载体将人pro-UK cDNA转入种植在人工血管上的EC内,并在体外测得其产物的表达,为小口径人工血管能早日进入临床应用提供了理论基础和实验依据。 在本研究的第一部分中,我们主要在细胞水平上从四个方面对适用于种植用的EC的进行了较全面地研究: 1.Collagenase与Trypsin消化EC的比较:取6根脐带,分成2组,每组各3根。Collagenase组用0.1%Collagenase消化EC。Trypsin组用0.25%Trypsin消化EC。结果显示,Collagenase组EC从接种到融合用6.8±0.5天,而Trypsin组EC从接种到融合用11.5±0.8(p<0.05)。从融合后细胞数上来看,Collagenase组平均为(106.7±16.4)×10~4/瓶,Trypsin组平均为(64.7±26.8)×10~4/瓶(p<0.05)。光镜下观察用Trypsin消化EC,细胞生长缓慢,不易融