第一部分癌干细胞及其标记物研究目的研究胆囊腺癌、癌旁上皮、腺瘤性息肉和慢性胆囊炎组织中前列腺干细胞抗原（prostate stem cell antigen,PSCA）、Oct-4干细胞抗原（Oct-4）、CD24和CD_44V6表达水平,探讨其临床病理意义及在胆囊腺癌发生发展中的作用及作用机理。方法108例胆囊腺癌、46例癌旁组织、15例腺瘤性息肉和35例慢性胆囊炎手术切除标本经4%甲醛固定后常规制作石蜡包埋切片,PSCA、Oct-4、CD24和CD_44V6染色方法均为Envision^TM免疫组化二步法。结果（1）108例胆囊腺癌PSCA、Oct-4、CD24和CD_44V6表达阳性病例分别为59例（54.6%）、60例（55.6%）、57例（52.8%）和60例（55.6%）,其评分值分别为2.09±1.94、2.06±1.86,2.43±1.65和2.52±1.60;46例癌旁组织PSCA、Oct-4、CD24和CD_44V6表达阳性病例分别为9例（19.6%）、10例（22.5%）、8例（17.4%）和9例（19.6%）,其评分值分别为0.82±1.11、0.85±1.02、0.78±1.36和0.82±1.39;15例腺瘤性息肉PSCA、Oct-4、CD24和CD_44V6表达阳性病例分别为4例（26.7%）、3例（20.0%）、3例（20.0%）和4例（26.7%）,其评分值分别为0.74±1.25、0.69±1.32、0.72±1.35和0.78±1.28;35例慢性胆囊炎PSCA、Oct-4、CD24和CD_44V6表达阳性病例分别为5例（14.3%）、5例（14.3%）、4例（11.4%）和6例（17.1%）,其评分值分别为0.68±1.21、0.67±0.95、0.54±1.44和0.58±1.46;PSCA、Oct-4、CD24或（和）CD_44V6表达阳性的癌旁组织、腺瘤性息肉和慢性胆囊炎胆囊上皮均呈中度至重度不典型增生;胆囊腺癌PSCA、Oct-4、CD24和CD_44V6表达阳性率及其评分明显高于癌旁上皮(PSCA,x²=10.09,P<0.01,τ=4.23,P.x²<0.01 Oct-4,x²=14.88,P<0.01,τ=4.32,P<0.01;CD24,x²=16.58,P<0.01,τ=5.89,P<0.01;CD_44V6,x²=16.90,P<0.01,τ=6.07,P<0.01)、腺瘤性息肉(PSCA,x²=4.12,P<0.05,τ=2.60,P<0.05;Oct-4,x²=6.66,P<0.01,τ=280,P<0.01;CD24,x²=5.66,P<0.05,τ=3.78 P<0.01;CD_44V6,X²=4.12,P<0.05,τ=4.05,P<0.01)和慢性胆囊炎(PSCA,X²=17.40,P<0.01,τ=4.15,P<0.01;Oct-4,x²=18.16,P<0.01,τ=4.21,P<0.01;CD24,x²=18.48,P<0.01,τ=6.10,P<0.01;CD_44V6,x²=15.69,τ=6.26,P（0.01）。（2）腺瘤癌变或高分化腺癌、肿块最大径<2cm、无淋巴结转移及侵犯胆囊外周围组织器官病例PSCA、Oct-4、CD24和CD_44V6表达阳性率及其评分明显低于低分化腺癌、肿块最大径≥2cm、淋巴结转移及侵犯胆囊外周围组织器官病例,差异均有显著性或高度显著性（P<0.05或P<0.01）。（3）胆囊腺癌中PSCA、Oct-4、CD24和CD_44V6表达水平相互之间具有高度一致性（P<0.01）,其评分值相互之间存在密切正相关(PSCAvs Oct-4,r=0.44,P<0.01;PSCA vs CD24,r=0.36,P<0.01;PCSA vsCD_44V6,r=0.49;P<0.01,Oct-4 vs CD24,r=0.51,P<0.01;Oct-4 vsCD_44V6,r=0.39,P<0.01;CD24 vs CD_44V6,r=0.48,P<0.01)。结论PSCA、Oct-4、CD24和CD_44V6作为癌干细胞标记物在胆囊腺癌发生、进展、转移及侵袭潜力方面具有重要作用,阳性或高水平表达者临床预后不良;癌组织中存在的癌干细胞有可能在胆囊腺癌发生发展中起重要作用,且影响胆囊腺癌临床生物学行为及其预后;检测胆囊良性病变组织中PSCA、Oct-4、CD24和CD_44V6 4种癌干细胞标记物表达水平对预防和早期发现胆囊癌可能具有重要临床应用价值。第二部分胆囊腺癌转移和侵袭调控机制研究第一章胆囊良恶性病变微血管和淋巴管计数及其意义目的研究胆囊腺癌、癌旁组织、腺瘤性息肉和慢性胆囊炎组织中微血管（MV）和淋巴管（LV）计数及其临床病理意义。方法108例胆囊腺癌、46例癌旁组织、15例腺瘤性息肉和35例慢性胆囊炎外科手术切除标本经4%甲醛固定后常规制作石蜡包埋切片,MV和LV染色方法均为S-P免疫组化法,低倍镜下选择MV和LV分布最丰富的10个区域,高倍镜下计数10个区域内MV和LV数,取其均值为该病例计数值。结果108例胆囊腺癌MV和LV计数均值（64.2±11.6,11.4±5.2）明显高于癌旁组织（28.2±12.4,τ=17.6,P<0.01;6.8±6.2,τ=4.63,P<0.01）、腺瘤性息肉（32.4±11.8,τ=9.94,P<0.01;5.6±2.9,τ=4.17,P<0.01）和慢性胆囊炎（22.2±11.3,τ=18.26,P<0.01;5.1±3.9,τ=6.63,P<0.01）。腺瘤癌变或高分化腺癌、肿块最大径<2cm、无淋巴结转移及未侵犯周围组织器官病例MV和LV计数均值明显低于低分化腺癌、肿块最大径≥2cm、淋巴结转移及侵犯周围组织器官病例（P<0.01）。胆囊腺癌中MV计数与LV计数呈密切正相关（r=0.38,P<0.01）。结论MV和LV计数可能是反映胆囊腺癌进展,临床生物学行为及预后的标记物第二章转移抑制调控基因的研究目的研究胆囊腺癌、癌旁组织、腺瘤性息肉和慢性胆囊炎组织中KAI-1mRNA、Kiss-1mRNA、MTA1和CD146表达水平及其临床病理意义。方法108例胆囊腺癌、46例癌旁组织、15例腺瘤性息肉和35例慢性胆囊炎组织经4%甲醛固定后常规制作石蜡包埋切片,KAL-1mRNA和Kiss-1mRNA染色方法为原位杂交染色方法,MTA1和CD146染色方法为Envision^TM免疫组化二步法。结果（1）胆囊腺癌KAL-1mRNA和Kiss-1mRNA表达阳性率（51.9%,53.7%）明显地低于癌旁组织（KAL-1mRNA,80.4%,x²=11.02,P<0.01;Kiss-1mRNA,82.6%,x²=11.48,P<0.01）腺瘤性息肉（KAL-1mRNA,86.7%,x²=6.48,P<0.05;Kiss-1mRNA,86.7%,x²=5.86P<0.05）和慢性胆囊炎(KAL-1mRNA,85.7%,x²=12.64,P<0.01;Kiss-1mRNA,85.7%,x²²=11.44,P<0.01);胆囊腺癌MTA1和CD146表达阳性率（48.1%,53.7%）明显高于癌旁组织（MTA1,26.1%,x²=6.46,P<0.05;CD146,30.4%,x²=7.02,P<0.01）,腺瘤性息肉（MTA1,20.0%,x²=4.22,P<0.05;CD146,20.0%,x²=8.59,P<0.01）和慢性胆囊炎（MTA1,8.6%,x²=13.31,P<0.01,CD146,5.7%,x²=25.00,P<0.01）。（2）腺瘤癌变或高分化腺癌、肿块最大径<2cm、无淋巴结转移及未侵犯周围组织器官病例KAL-1mRNA、Kiss-1mRNA表达阳性率明显高于低分化腺癌、肿块最大径≥2cm、淋巴结转移及侵犯周围组织器官病例（P<0.05或P<0.01）,但MTA1和CD146在胆囊腺癌中表达与KAL-1mRNA、Kiss-1mRNA表达相反（P<0.05或P<0.01）。（3）KAL-1mRNA和/或Kiss-1mRNA表达阳性胆囊腺癌MV和LV计数明显低于阴性表达病例（P<0.01）;MTA1和/或CD146表达阳性胆囊腺癌MV和LV计数明显高于阴性表达病例（P<0.01）。结论KAL-1mRNA、Kiss-1mRNA、MTA1和CD146表达水平均为反映胆囊腺癌发生、进展,临床生物学行为及预后的重要分子标记物,均为重要的调控胆囊癌等恶性肿瘤转移和侵袭能力的重要指标,其作用可能与调控肿瘤血管生成和淋巴生成有关。