凉山半细毛羊QM基因的克隆、组织表达及生物信息学分析

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QM基因是一种与肿瘤抑制,细胞生长,分化,发育和凋亡等有关的重要基因。QM同源基因广泛地存在于动物、植物以及真菌,目前已在小鼠、鸡、果蝇、牛、酵母、玉米和水稻等生物中克隆了QM同源基因,这些基因的核苷酸及其编码的氨基酸序列高度保守。迄今为止,绵羊中尚未见QM基因的相关报道。本研究首次从凉山半细毛羊基因组中克隆出QM基因,并构建出QM基因分子进化关系,为QM的分子进化以及生物学功能的深入研究打下基础。本研究应用电子克隆的方法,克隆出绵羊QM基因,并构建15个物种间QM基因分子进化关系。同时利用QM基因的保守区域,设计了特异性引物,克隆出凉山半细毛羊QM同源基因,命名为SQM(GeneBank登陆号:EU143791),并对其进行了生物信息学分析。SQM基因全长771 bp,含有一个最长为645 bp的完整的开放阅读框,5’UTR长度为70 bp,第71位到716位为ORF,长645 bp,编码214个氨基酸,3’UTR长度为55 bp,在754 bp—759 bp区域内有一个AATAAA加尾信号。SQM基因编码的多肽,预测其分子量大小为24.61 kDa,等电点pI为10.6,其中Asp和Glu酸性氨基酸残基数为7.9%,碱性氨基酸Arg和Lys残基数为20.92%,表明绵羊QM基因蛋白为碱性蛋白质。预测SQM蛋白二级结构有6个α螺旋区,富含10个β折叠片,其余部分为无规卷曲。绵羊QM基因和牛QM基因在进化上的距离最短,同时也发现QM基因具有极大的保守性。采用数字化差异显示分析,对绵羊EST数据库中主要组织细胞如脑、淋巴网状内皮细胞、肾、脾脏、肝脏、肠和肌肉中QM的表达进行了研究,探讨了SQM基因在不同器官之间、正常组织与病变组织之间的表达情况。发现QM基因在脾脏和淋巴网状内皮细胞中的表达量大于其他组织,在病变组织中的表达强于在正常组织中的表达。同时,QM基因在绵羊骨组织分化细胞中也有较强表达,推断QM基因与绵羊的免疫调控,细胞分化有密切的关系。采用RT-PCR方法,选取凉山半细毛羊肝脏,肾脏,心脏和肌肉等四个组织,通过酶标仪定量,进行了QM基因的表达分析,在凉山半细毛羊中,QM基因在心脏和肝脏有较强表达,初步推断它与凉山半细毛羊心脏功能有密切关系,值得深入研究。
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