【摘 要】
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荧光关联谱方法是一项近年来发展很快的实验分析方法,它通过分析微小探测区域(一般小于1μm3)内少量发光粒子由于布朗运动产生的荧光涨落信号,得到粒子扩散系数和溶液浓度等物理参数值,进而获得粒子的结构和状态、所处的微观环境以及微观相互作用等信息。由于测量具有很高的灵敏度、测量时不破坏研究体系的平衡状态以及可以进行实时监测等优点,荧光关联谱技术在化学、医学和生命科学等领域逐渐显现出它广阔的应用前景。本论
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荧光关联谱方法是一项近年来发展很快的实验分析方法,它通过分析微小探测区域(一般小于1μm3)内少量发光粒子由于布朗运动产生的荧光涨落信号,得到粒子扩散系数和溶液浓度等物理参数值,进而获得粒子的结构和状态、所处的微观环境以及微观相互作用等信息。由于测量具有很高的灵敏度、测量时不破坏研究体系的平衡状态以及可以进行实时监测等优点,荧光关联谱技术在化学、医学和生命科学等领域逐渐显现出它广阔的应用前景。本论文的工作主要包括以下方面:首先对荧光关联谱技术的原理、理论和实验,产生、发展和应用的历史,以及当前国际上的研究状况做了比较全面的介绍。强激发光产生的饱和激发会改变激光诱导荧光的空间分布函数,从而影响荧光关联谱的测量结果。论文首先根据饱和激发的物理模型, 推导出强激发光情况下有效探测区域变化的定量公式,获得了荧光关联谱测量所得到的粒子数和特征扩散时间与饱和激发光强和激光光强的函数关系,并用于消除饱和激发造成的误差。采用Monte Carlo模拟方法和荧光关联谱实验,我们对理论分析结果进行了验证。结论将有助于完善荧光关联谱分析方法的理论模型,为高激发光强度下的荧光关联谱探测提供依据。由于荧光关联谱具有探测灵敏度达到单分子量级,探测区域达到飞升量级,分析过程给出粒子的数目、扩散系数等微观信息等其它激光诱导荧光方法无可比拟的优势,所以荧光关联谱方法为微流控芯片分析提供了强有力的检测手段。通过和清华大学化学系分析中心的合作,我们利用荧光关联谱装置作为检测手段在微分析通道内实现了免疫球蛋白IgG的快速免疫检测,使整个分析时间大大缩短。
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