【摘 要】
:
人参是世界公认的名贵中药材,种子发芽率低,生长年限长,易受病害影响,育种进程缓慢。人参种植过程中常有多茎形态参出现,多茎参较单茎参相比光合面积增加,产量增加,在人参栽培育种工作中,多茎参形态更符合育种目标。根据已有研究,推测激素对参形态有重要的影响。本研究通过单、多茎形态人参转录组数据分析筛选出油菜素内酯信号转导通路中重要转录因子BZR1,通过RT-PCR方法克隆人参BZR1基因,结合人参愈伤组织
论文部分内容阅读
人参是世界公认的名贵中药材,种子发芽率低,生长年限长,易受病害影响,育种进程缓慢。人参种植过程中常有多茎形态参出现,多茎参较单茎参相比光合面积增加,产量增加,在人参栽培育种工作中,多茎参形态更符合育种目标。根据已有研究,推测激素对参形态有重要的影响。本研究通过单、多茎形态人参转录组数据分析筛选出油菜素内酯信号转导通路中重要转录因子BZR1,通过RT-PCR方法克隆人参BZR1基因,结合人参愈伤组织及人参植株进行基因转化实验,采用qRT-PCR方法探究该基因在人参愈伤组织盐胁迫条件下BZR1基因表达量,分析该基因表达特性。建立基于人参愈伤组织的外源基因转化体系,为进一步研究人参单、双茎形态形成机制提供参考。主要研究结果如下:1、通过正交试验设计方法对诱导人参愈伤组织培养基进行优化筛选,最适合人参愈伤组织诱导的外植体是人参种胚,最适诱导培养基为:MS+6-BA(0.8 mg·L-1)+2,4-D(2.0 mg·L-1)+IBA(0.1 mg·L-1)+KT(0.1 mg·L-1)+琼脂6.5 g·L-1+蔗糖30g·L-1,2,4-D和6-BA是人参愈伤组织诱导的必须激素。人参愈伤组织芽分化的最适培养基为:MS+6-BA(1.0 mg·L-1)+2,4-D(0.2 mg·L-1)+IAA(1.5 mg·L-1)+琼脂6.5 g·L-1+蔗糖30 g·L-1;人参愈伤组织不定根分化的最适培养基为:MS+6-BA(0.5mg·L-1)+NAA(1.0 mg·L-1)+琼脂6.5 g·L-1+蔗糖25g·L-1。2、通过单、多茎形态人参转录组数据分析筛选出油菜素内酯信号转导因子BZR1,利用实时荧光定量PCR的方法研究了单、双茎形态参BZR1基因的差异表达情况,进一步验证转录组数据。3、根据转录组数据中提供的BZR1基因序列设计引物,利用RT-PCR法同源克隆得到一条长度966 bp的人参BZR1基因,命名为PgBZR1(GenBank登记号为:No.SUB4753701),并对其进行亚克隆、序列测定、生物信息学分析及原核表达分析,发现该基因编码321个氨基酸,与胡萝卜BZR1基因同源性最高,诱导蛋白与预测蛋白相对分子质量一致,大小为34.5 kDa。4、构建PRI201-PgBZR1植物表达载体,通过电击法转化LBA4404农杆菌,鉴定阳性克隆。5、通过抗生素的敏感性筛选试验,得出300 mg·L-1卡那霉素适合阳性愈伤组织的筛选,50 mg·L-1的潮霉素最适合人参愈伤组织共培养的抑菌抗生素。6、利用花序浸染法初步建立人参植株转化体系,通过农杆菌介导初步建立人参愈伤组织转化体系。7、在盐胁迫条件下检测人参BZR1基因表达量,总体趋势为6 h时BZR1基因表达量显著下调,12 h后表达量升高,在200 mmol·L-1NaCl条件下3 h时BZR1基因表达量最高。并通过盐胁迫条件下愈伤组织的生长情况初步认定,PgBZR1基因能够增强人参愈伤组织的耐盐性。
其他文献
研究背景:脑胶质瘤是目前中枢神经系统发病率最高的恶性肿瘤,约占全部颅内肿瘤的50%-60%。具有强侵袭性、高复发率、预后较差的特点,目前的手术、放疗、化疗等手段都不能达到较好的疗效。所以越来越多的研究者在胶质瘤的分子生物学特性中探求胶质瘤诊断治疗的新思路。IL-33是新发现的白介素家族细胞因子,是新型的炎症报警素。在众多的肿瘤如直肠癌、胃癌、淋巴癌等的研究者中,都发现可以通过结合受体ST2,激活如
肿瘤细胞即使在有氧条件下仍通过糖酵解为细胞供能,这一现象称为“Warburg效应”。由于肿瘤细胞的快速增殖需要摄取大量的葡萄糖供细胞所用,葡萄糖经酵解产生大量乳酸,因此肿瘤细胞中常伴有酸性的微环境。脑组织由于以葡萄糖的利用为主,同时存在血脑屏障,肿瘤细胞的快速增殖导致其形成一个缺氧、酸性和营养缺乏的微环境。研究发现肿瘤细胞中的乳酸可以通过单羧酸转运蛋白MCT1/MCT4的转运而被周围细胞重新利用,
“圆锁”是集个人、家庭、社交网络于一体的民间成人礼,集中反映了人们的价值观念、行为规范。20世纪50年代之前,由于男尊女卑传统观念和经济条件的限制,圆锁仪式是专属于男性的成人礼;20世纪60、70年代,圆锁仪式在政治环境的强压下转为秘密举办,过程简单;改革开放以后,随着人们生活水平的提高和思想观念的解放,圆锁仪式逐渐发展成为男女平等、过程隆重的成人礼。圆锁仪式早年举办空间就是自家的“院落”,现在则
自动驾驶可以减少交通事故,为人们提供安全、舒适的出行方式,其最具有挑战性的任务之一是交通场景理解,包括车道线检测和语义分割等计算机视觉任务。车道线检测能够指导车辆在正确的区域进行行驶,为车道保持提供依据,当车辆偏离车道时为驾驶员提供预警,有助于安全驾驶。鉴于汽车行驶场景的复杂性和多样性,如何在复杂多样的行驶场景中快速鲁棒地检测出车道线是车道线检测的难点。车道线由实线、虚线、车道汇合线和分离线等组成
以孕马尿(简称PMU)为原料研发和生产出的结合雌激素生物制药,成为新疆特色马产业链的重要支点。新疆伊犁作为孕马养殖和PMU收购的重要基地,其孕马养殖的生产经营状况与效益直
肿瘤疫苗是肿瘤免疫治疗的重要手段,其中肿瘤抗原疫苗是采用肿瘤抗原激活免疫系统,引起针对这些抗原的细胞免疫反应。在前期的工作中,我们采用聚乙烯亚胺(PEI25kDa)作为抗原
我国农产品的发展经历了“买难”与“卖难”、“两头诉苦、中间喊冤”的流通困境,因而人们致力于探索出高效的农产品流通模式。在我国农产品贸易过程中,农户与超市进行对接更倾向于通过合作社来实现。但是,由于我国物流组织化程度低、配套设施不齐全、流通成本高和产销环节不连贯等原因,农民合作社“农超对接”流通效率整体偏低,而政府出台了相关扶持政策,其中政府信贷扶持政策对于“农超对接”流通效率的影响以及影响程度如何
招呼语是语言学习者学习一门语言时必定会接触到的语言形式。招呼语使用得体与否以及形式的多样性反映了学习者语言能力的高低。在以往的研究中,有学者研究俄罗斯、日本、韩
背景与目的:可降解聚合物涂层和无聚合物涂层支架是新一代药物洗脱支架,旨在降低永久性聚合物涂层支架因聚合物长期残留带来的不良影响,进一步改善介入治疗的临床预后。目前已有研究初步验证了两种新型支架的安全性及有效性,但在无保护左主干病变介入治疗中的相关研究较少。本研究通过比较无保护左主干病变患者接受永久性、可降解、无聚合物涂层支架植入术后的临床疗效,以评估可降解聚合物涂层支架和无聚合物涂层支架在无保护左