杆状病毒AcMNPV pk-1基因的结构与功能研究

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在病毒与细胞的相互作用过程中,病毒和细胞蛋白的磷酸化/去磷酸化与病毒的生命周期紧密相关。许多病毒在其纯化的病毒粒子中都含有蛋白激酶(protein kinase, PK)的活性。这一类的蛋白激酶被称为病毒粒子相关蛋白激酶(VAPK)。AcMNPV中的VAPK蛋白是PK-1,该激酶由病毒编码,它是一个非常保守的基因,为蛋白激酶的同源基因。AcMNPV的pk-1基因是一个必需基因,它的缺失将导致病毒不能正常的感染复制和组装。本研究旨在探讨pk-1基因行使正常功能的必需功能域的位置,以及PK-1激酶活性对病毒复制的影响。另外,探讨pk-1基因对不同时期启动子的影响,从而揭示pk-1基因的部分功能也是本研究的目的之一。论文共分四个章节:第一章主要在杆状病毒的分类、生活史及复制周期、基因组、杆状病毒表达载体系统以及杆状病毒的应用等方面对杆状病毒做了概括性的介绍。同时还介绍了AcMNPV的pk-1基因的背景知识及研究的目的意义等。第二章是对AcMNPV pk-1基因功能域的鉴定分析。通过bac-to-bac操作系统将各截短型pk-1基因插入到缺失了pk-1的病毒基因组中,得到一系列的重组bacmids。转染感染实验表明包含PK-1蛋白51-183aa片段的截短型能对pk-1的缺失进行拯救;超薄电镜切片观察结果显示能拯救的重组病毒均产生了正常形态的病毒粒子,而不能拯救的重组病毒形态结构异常;一步生长曲线表明各能有效拯救的截短型重组病毒在96h时都能达到很高的滴度。第三章是对AcMNPV pk-1基因功能的研究。将突变型的pk-1基因插入到缺失了pk-1的病毒基因组中,得到vAc△pk-1-D137A,转染感染实验说明PK-1蛋白的激酶活性对病毒复制是至关重要的;用不同时期启动子启动egfp,将这段基因片段插入到pk-1缺失的病毒基因组中,从转染实验结果可知,在pk-1缺失的情况下,各不同时期的启动子都能很好地启动,发挥作用。第四章是对实验结果的总结和讨论。
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