【摘 要】
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电离辐射(包括电磁和粒子辐射)作用于生物体后会引起生物分子的复杂反应及细胞凋亡或坏死等,并且可以产生丰富的生物学效应。蛋白质是电离辐射重要靶分子,如何在痕量水平观测在辐
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电离辐射(包括电磁和粒子辐射)作用于生物体后会引起生物分子的复杂反应及细胞凋亡或坏死等,并且可以产生丰富的生物学效应。蛋白质是电离辐射重要靶分子,如何在痕量水平观测在辐照作用下蛋白质/肽分子的辐射损伤及构效关系变化成为在细胞水平解析辐射生物效应的关键问题之一。表面增强拉曼光谱技术自发现以后基于其灵敏度高和有指纹特性等优点而被广泛应用于生物检测,本论文工作将该技术运用到蛋白质/肽分子辐射损伤检测和分析。研究重要的生物分子谷胱甘肽(glutathione,GSH)、细胞色素c(cytochrome c,Cyt c)在粒子辐射(等离子体放电等)作用下的辐射损伤和构效关系,探讨了辐射产生活性氧(reactive oxygen species,ROS)引起生物分子发生变化的机制。此外,我们还对电子束辐射条件下辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)的损伤进行了检测和分析。 论文的主要内容包含以下几个部分: 1.利用环糊精还原硝酸银制备的银溶胶用于SERS检测,基于SERS技术实现了GSH、GSSG、Cyt c等纯品以及混合体系检测。利用SERS分别检测了GSH、GSSG的光谱,确定C-N(1051cm-1)和S-S(509cm-1)为GSH、GSSG的特征谱带,并依据特征峰得到GSH、GSSG的SERS强度随浓度变化的标准曲线,并获得I509/I1051的强度比值随GSSG/GSH浓度变化的标准曲线,实现了混合物的SERS定量检测。 2.利用SERS技术研究了介质阻挡放电条件下GSH损伤的检测和分析。检测GSH样品放电处理后的SERS光谱,基于GSH、GSSG的SERS特征谱带,证明放电后体系内生成了GSSG,实现了放电处理后对反应产物的定性和定量分析;计算了GSH转化为GSSG的转化率。并用HPLC等常规方法验证了SERS分析的结果。 3.研究蛋白质在粒子辐射作用下的氧化损伤,特别是利用SERS技术研究了介质阻挡放电条件下Cyt c的氧化和损伤。通过比较放电处理前后Cyt c的SERS光谱和紫外-可见吸收光谱,证实了放电引起Cytc的氧化和损伤,建立了基于SERS研究Cytc辐射损伤的方法。此外,研究了高能电子束辐照条件下HRP的辐射损伤,探讨了电子辐射产生的活性氧作用于HRP分子引起HRP中辅基血红素的损伤和肽链损伤及其相互关系。
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