【摘 要】
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目的:本研究采用随机不可预见性应激结合孤养法制备慢性应激抑郁大鼠模型,通过观察大鼠行为学改变、血清P物质、血管活性肠肽以及肠道微生物组学的变化来探讨高尤-13味丸的抗抑郁作用机制。方法:1.分组将48只清洁级、雄性大鼠在温湿度适宜的饲养室适应性饲养一周后随机分为空白对照组、模型组、高尤-13味丸（低、中、高剂量）组和氟西汀组,每组8只大鼠。空白对照组大鼠4只为一笼饲养,其余各组大鼠均单笼孤养。2.
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目的:本研究采用随机不可预见性应激结合孤养法制备慢性应激抑郁大鼠模型,通过观察大鼠行为学改变、血清P物质、血管活性肠肽以及肠道微生物组学的变化来探讨高尤-13味丸的抗抑郁作用机制。方法:1.分组将48只清洁级、雄性大鼠在温湿度适宜的饲养室适应性饲养一周后随机分为空白对照组、模型组、高尤-13味丸（低、中、高剂量）组和氟西汀组,每组8只大鼠。空白对照组大鼠4只为一笼饲养,其余各组大鼠均单笼孤养。2.模型的制备每天随机给予1种刺激,主要包括潮湿垫料（24h）、禁食（24h）、禁水（24h）、夹尾（1min）、昼夜颠倒、冰水游泳（4℃水,5min）、束缚（2h）等,采用这种随机不可预见性应激结合孤养法制备慢性应激抑郁大鼠模型。每日观察并记录大鼠饮食状况、毛色光泽、精神状态、活动度、大小便等情况。3.给药方法空白对照组大鼠不做任何干预,自由进食、饮水。模型组大鼠造模刺激前1h灌胃蒸馏水,按10ml/kg灌胃。高尤-13味丸低、中、高剂量（0.25g/kg、0.5g/kg、1.0g/kg）组大鼠每天分别在造模前1h按10ml/kg灌胃。氟西汀组大鼠每天造模刺激前1h灌胃给药。按3.3mg/kg用蒸馏水配成氟西汀溶液,按10ml/kg灌胃。4.观察指标及检测方法采用旷场试验、糖水实验和Morris水迷宫实验评价行为学改变。采用酶联免疫法（ELISA）测定大鼠血清中P物质（SP）、血管活性肠肽（VIP）含量。采用16S r RNA高通量测序技术,检测大鼠粪便中的肠道菌群,分析各组大鼠肠道菌群的多样性及丰度。结果:1.行为学实验本实验中模型组大鼠体重增长较空白对照组缓慢,且随着时间两组之间的差异性更显著（P＜0.01）,不同干预组大鼠的体重较模型组明显增加（P＜0.05）。在旷场实验中模型组大鼠穿越横格次数、垂直运动均较空白对照组明显减少（P＜0.05）,高尤-13味丸干预后明显改善大鼠穿越横格次数、垂直运动（P＜0.05）。在Morris水迷宫实验中,定位航行方面,模型组与空白对照组之间有差异（P＜0.05）;与模型组比较,高尤-13中剂量干预组有显著差异（P＜0.01）,在空间搜索方面,各组之间的差异性无统计学意义。糖水实验中,与空白对照组比较,模型组大鼠糖水偏好程度显著降低（P＜0.01）。不同干预组大鼠糖水偏好较模型组明显提高,其中高尤-13中剂量和高剂量组的效果更佳显著（P＜0.01）。2.ELISA法检测血清SP、VIP含量与空白对照组相比,模型组大鼠血清SP含量明显升高（P＜0.05）、VIP含量明显降低（P＞0.05）。与模型组比较,氟西汀组和高尤-13中剂量组大鼠血清SP含量较模型组显著下降（P＜0.05或P＜0.01）;血清VIP含量方面,不同干预组大鼠血清VIP含量具有上升趋势,但差异无统计学意义（P＞0.05）。3.16Sr RNA高通量测序技术分析与空白对照组比较,模型组的厚壁菌门、拟杆菌纲、乳杆菌目、乳球菌科、消化链球菌属丰度降低,拟杆菌门、放线杆菌纲、拟杆菌目、乳酸菌科、梭菌属丰度提高。与模型组比较,高尤-13味丸干预组放线菌门、杆菌纲、乳杆菌目、乳酸菌科、乳酸菌属丰度降低,拟杆菌门、梭菌纲、梭菌目、梭菌科、颤螺旋菌属丰度提高。结论:1.不可预见性慢性应激结合孤养可诱导大鼠抑郁样行为学改变。用高尤-13味丸干预后有效改善慢性应激抑郁大鼠行为学变化。2.慢性应激抑郁模型大鼠血清中SP含量升高、VIP含量降低。高尤-13味丸干预可调节慢性应激抑郁模型大鼠血清中SP、VIP含量,从而改善其抑郁状态。3.抑郁症的发病与肠道菌群微生物稳态失衡有关。实验结果表明,高尤-13味丸干预可以改善模型大鼠肠道菌群结构,调节部分物种的丰度。认为,通过调节肠道菌群结构及功能,改善行为和情绪是高尤-13味丸的抗抑郁作用可能机制之一。
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