论文部分内容阅读
目的:
比较不同类型斜视眼外肌超微结构变化的异同,研究这种变化与斜视眼外肌离子水平变化之间的关系,探讨不同类型斜视的发病机制。
材料与方法:
1.眼外肌超微结构观察
正常人眼外肌标本5例,取自山东省眼库。其中内直肌标本2例,外直肌标本2例,上直肌标本1例;斜视眼外肌标本35例,取自我院行斜视矫正手术的患者。其中,共同性内斜视9例(含知觉性内斜视4例),共同性外斜视22例(含知觉性外斜视6例),麻痹性斜视3例,先天性眼外肌纤维化1例。
斜视组眼外肌标本于斜视矫正术中留取,去除手术中损伤到的部位以及肌肉表面的结缔组织。迅速将取下的眼外肌固定,常规脱水、浸透、包埋、2.0μm半薄切片Toluidineblue染色定位后,制作110nm超薄切片,醋酸双氧铀和枸橼酸铅双重染色后,透射电子显微镜下观察眼外肌超微结构的改变。
2.能量分散型X线显微分析法测定斜视患者眼外肌内各种元素的含量
斜视眼外肌标本于斜视矫正术中留取,其中包括共同性内斜视标本8例(含知觉性内斜视4例),共同性外斜视标本10例(含知觉性外斜视3例)。取下的眼外肌标本立即使用O.C.T包埋(Tissue-TekO.C.TCompound4583),-80℃冷冻保存。行5μm冰冻切片,扫描电镜下进行检测肌肉标本的初步定位后,使用能量分散型X线显微分析法测定肌肉内各种元素的含量。
3.免疫组织化学方法测定斜视患者眼外肌内的μ-calpain(calpainⅠ)含量
斜视眼外肌标本于斜视矫正术中留取,其中包括共同性内斜视的外直肌标本5例,共同性外斜视的内直肌标本11例(含知觉性外斜2例)。先天性上斜肌麻痹患者的下斜肌标本3例。眼外肌标本行常规的固定、水洗、脱水、透明、浸蜡、包埋,0.4μm切片。采用Masson三色染色法观察标本肌原纤维和胶原纤维的分布情况。使用SABC法测定斜视患者眼外肌内μ-calpain的含量(一抗选用兔抗人calpainⅠ),并行DAB染色、观察。
结果:
1.眼外肌的超微结构观察和比较
(1)正常人眼外肌
正常眼外肌肌纤维排列整齐,明、暗带相间,Z线平直清晰,肌丝紧密的排列成梭形,肌原纤维间可见大量线粒体。正常人内直肌与外直肌相比,线粒体多呈圆形,大小更加均一,内容物更致密。而外直肌的Z线、M线等横纹结构较内直肌更清晰。
(2)不同类型斜视患者眼外肌
1)共同性外斜视患者的内直肌
共同性外斜视患者的内直肌无论病程长短、斜视程度的轻重,都残留有横纹结构;Z线变得迂曲、模糊;肌丝排列疏松、纤细;线粒体明显减少;肌浆网扩张。其中,知觉性外斜视患者的内直肌与原发性共同性外斜视患者的内直肌相比较,知觉性者肌肉成分更少,残留的肌肉组织形态变化更严重。
2)共同性内斜视患者的外直肌
共同性内斜视患者的外直肌,肌纤维成分消失;代之为胶原纤维,而且排列紊乱;这种新生的胶原纤维在减弱侧和增强侧其超微形态学存在差异,即增强侧的胶原纤维排列致密,减弱侧纤维排列疏松且增粗。其中,知觉性内斜视患者的外直肌与原发性共同性内斜视患者的外直肌相比较,两者在形态学上并未见明显差异。
3)麻痹性斜视患者的眼外肌
麻痹性斜视患者的拮抗侧肌肉形态基本正常;麻痹侧的肌肉改变基本与共同性斜视患者的眼外肌病变相一致。
4)先天性眼外肌纤维化患者的眼外肌
先天性眼外肌纤维化的患者内、外直肌肌肉成分均消失,代之以排列紧密、方向一致的胶原纤维。
2.能量分散型X线显微分析法测定斜视患者眼外肌中各种元素的含量
原发性共同性内斜视、知觉性内斜视、原发性共同性外斜视与知觉性外斜视4个组中,斜视患者眼外肌各个元素含量不同,存在统计学差异(P≤0.05)。
3.免疫组织化学方法测定斜视患者眼外肌μ-calpain(calpainⅠ)含量
Masson三色染色显示肌原纤维呈红色,胶原纤维呈蓝色。
对照Masson三色染色结果行免疫组织化学染色,先天性上斜肌麻痹的下斜肌组织中的肌原纤维未见μ-calpain表达;共同性外斜视的内直肌标本中肌原纤维μ-calpain呈阳性表达,胶原纤维未见μ-calpain表达;共同性内斜视的外直肌组织中满布胶原纤维,未见μ-calpain表达。
结论:
1、不同类型的斜视眼外肌超微结构变化异同,提示其存在不同的发病机制和发展归转。
2、不同类型斜视眼外肌中各种元素含量不同提示不同类型斜视眼外肌的病理变化不同。
3、眼外肌离子水平的变化可能是引起肌肉超微结构变化的一个原因。