anisomycin体内抗CT26小鼠结肠癌效果及其机制初探

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背景:有文献报道anisomycin在体外能诱导多种细胞凋亡,本研究组之前首次尝试将anisomycin应用于体内治疗艾氏腹水瘤和黑色素瘤,发现它能抑制艾氏腹水瘤的生长,明显延长荷瘤小鼠存活期。而有关anisomycin体内给药对其它不同组织学类型肿瘤是否有效迄今尚未见报道。显然,进一步尝试和探索anisomycin体内治疗消化系统肿瘤的可能性具有重要的理论意义,可望为其临床应用提供实验依据。目的:探索anisomycin体内治疗小鼠结肠癌CT26的可能性及其初步抗肿瘤机制。方法:在体外以CT26细胞为模型,用MTT法检测不同浓度anisomycin处理不同时间对细胞增殖的影响;应用流式细胞术检测anisomycin处理后CT26细胞的生长周期和细胞凋亡;Western blot分析不同药物浓度和不同处理时间对CT26细胞凋亡相关蛋白表达的影响。在体内建立荷CT26实体瘤BALB/c小鼠模型,瘤内注射5mg/kg anisomycin,以同剂量的adriamycin治疗作为阳性对照。观察小鼠肿瘤生长情况、存活时间和免疫器官的变化;HE染色观察肿瘤组织病理改变和淋巴细胞浸润;TUNEL法与流式细胞术检测肿瘤组织内细胞凋亡变化;Western blot分析肿瘤组织内凋亡相关蛋白的表达水平;免疫组织化学法检测肿瘤标记物癌胚抗原(carcino-embryonic antigen, CEA)在肿瘤组织中的表达情况;ELISA检测荷瘤小鼠血清中相关细胞因子水平。结果:anisomycin在体外能够显著抑制CT26肿瘤细胞的增殖,处理48h和72h后抑制率最为明显;anisomycin组的细胞增殖抑制率高于adriamycin组。随着anisomycin浓度升高,sub-G0/G1期细胞增加,而G0/G1细胞减少,晚期细胞凋亡比例增加,caspase-3、cleaved caspase-3、cleaved caspase-8和cleaved caspase-9等凋亡蛋白的水平也随之升高。与对照组比较,anisomycin治疗组小鼠的肿瘤体积明显缩小,瘤重减轻,存活时间显著延长,而adriamycin治疗组的肿瘤亦明显缩小,但小鼠存活时间低于anisomycin治疗组;anisomycin治疗组小鼠的胸腺系数增高,脾系数减低,肿瘤组织的细胞凋亡比例显著高于本课题受国家自然科学基金项目(No.81172824)资助.对照组与adriamycin治疗组,肿瘤组织细胞中caspase-3、cleaved caspase-3、cleaved caspase-8和cleaved caspase-9明显上调,并与原位肿瘤组织细胞的凋亡变化一致;anisomycin治疗组和adriamycin治疗组肿瘤组织中CEA在组织中的表达量似低于对照组。anisomycin治疗组小鼠血清中INF-γ、TNF-α和TGF-β的水平亦高于对照组。结论:结果表明,anisomycin在体内能够显著抑制结肠癌CT26的生长,增加荷瘤小鼠的存活率,其抗肿瘤作用可能与anisomycin抑制CT26细胞增殖和周期、激活caspase途径诱导肿瘤细胞凋亡密切相关。
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