时间分辨荧光免疫分析法是近十年发展起来的一种微量分析方法,是利用免疫反应的高特异性和标记示踪物的高度灵敏性相结合而建立的一类非放射性的新兴检测技术。近年来以其具有灵敏度高、示踪物稳定、标准曲线范围宽、不受样品自然光干扰、无放射性污染、多标记等优点逐渐为人们所重视。由于环境雌激素对内分泌系统具有较强的干扰作用,可以导致畸形、发育异常、生殖功能障碍、代谢紊乱、癌症等。环境雌激素种类繁多分布广泛,不仅影响人类健康,也威胁到生物物种的存亡。建立环境雌激素的分析检测方法对于研究环境雌激素类物质的迁徙、转化、作用机理等方面具有重要的意义,已成为国际上分析化学和环境化学的热门话题。　　本论文在稀土元素标记抗体的制备、免疫分析方法的建立方面展开工作。建立了时间分辨荧光免疫分析测定单组份的方法,同时利用双标记技术对双组份进行测定,建立了双组份同时测定的时间分辨荧光免疫分析方法。这些方法对推动新型环境监测方法的研究及扩大生物技术的应用,具有重要的理论和现实意义。　　全文分为以下五部分:　　一、完全抗原的合成和标记抗体的制备　　雌二醇、雌三醇、己烯雌酚和双酚 A分子量较小,它们都是半抗原小分子,小分子本身不能被现有的固相载体吸附,必须与大分子载体偶联后,才能通过载体的作用将半抗原包被到固相载体上。本文合成了雌二醇、雌三醇、己烯雌酚和双酚A的完全抗原,同时利用稀土离子标记了抗体。　　二、时间分辨荧光免疫分析测定己烯雌酚　　以二乙烯三胺五乙酸酐(DTPAA)为铕的螯合剂,采用两步法标记抗己烯雌酚(DES)抗体,建立了竞争型时间分辨荧光免疫分析测定己烯雌酚(DES)的新方法,比普通荧光免疫分析灵敏度提高100倍,在0.001~100 ng/mL之间有良好的线性,其线性回归方程为ΔI(I0-I)=2855.44lgC+11351.3,相关系数为0.9933,检测限为1pg/mL,最低检出限为0.595pg/mL。将此方法用于血清样品和水样的测定,并同时采用异硫氰光素(FITC)标记的羊抗兔抗体为分析试剂的荧光免疫分析方法做了对照试验,相关性良好,测定结果令人满意。　　三、时间分辨荧光免疫分析法测定双酚A　　利用完全抗原包被微孔板,以铕标记的抗双酚A(BPA)抗体为分析试剂,建立了双酚A的竞争免疫反应分析方法并对抗原浓度、抗体浓度、pH值等条件进行了优化。此方法在0.001~1000ng/mL之间有良好的线性,其线性回归方程为ΔI(I0-I)=897.34lgC+3644.2,相关系数为0.9892,方法的检测限为1pg/mL,最低检出限为0.623pg/mL。将此方法用于食品包装袋浸取液,塑料瓶装水和血清加标样品的测定,采用传统的荧光免疫分析方法进行了对照试验,效果良好。　　四、时间分辨荧光免疫分析同时测定己烯雌酚和双酚A　　采用铕和钐两种稀土元素标记的抗己烯雌酚抗体和抗双酚抗体作为分析试剂,利用两种不同的完全抗原同时包被微孔板,建立了竞争法免疫反应模式,利用时间分辨荧光分析技术对己烯雌酚和双酚A进行了测定,其DES在0.0064ng/mL~500ng/mL有良好的线性,相关系数为0.9886,而BPA在0.032ng/mL~500ng/mL,线性相关系数为0.9928。将此方法用于水样和血清样品的测定,结果令人满意。　　五、雌二醇和雌三醇同时测定的时间分辨荧光免疫方法　　以二乙烯三胺五乙酸酐(DTPAA)为双功能螯合剂,采用两步标记法标记了抗雌二醇(E2)抗体和抗雌三醇(E3)抗体,建立了竞争法免疫反应模式,利用时间分辨荧光分析技术对雌二醇(E2)和雌三醇(E3)进行了同时测定并对包被抗原的浓度、抗体的浓度、pH值等进行了优化,实验得到E2在0.001ng/mL~100ng/mL有良好的线性,相关系数为0.9921,检出限为0.640pg/mL,而E3在0.001ng/mL~100ng/mL也具有良好的线性,线性相关系数为0.9976,检出限为0.798pg/mL。将此方法用于水样和血清样品的测定,结果令人满意。