中药复方汤剂是中医用药的常见形式,但是传统汤剂的煎煮、携带不便,标准难以统一,影响其临床应用,因此简便易用、满足现代生活节奏的经典名方标准颗粒的研发意义重大。为此,2013年“重大新药创制”国家科技重大专项启动了“经典名方标准颗粒研究”的课题,由仲景宛西制药股份有限公司等6家企业联合有关专家开展包括橘皮竹茹汤与甘草泻心汤在内的20个经典名方颗粒剂的示范性研究开发,目标是在遵循传统煎煮方法、坚持“原汁原味”特点的同时,研究建立现代生产工艺和质量控制方法,生产出经典名方的现代化产品,既标准颗粒。而该项工作的关键是保证经典名方标准颗粒与其传统汤剂物质基础的基本一致,从而满足两者在处方、治疗病症和用法上基本相同的要求,为标准颗粒的免临床提供依据。为保证标准颗粒在处方、疗效和用法上与传统汤剂的一致,急需建立完善的经典名方传统汤剂质量表征方法。本课题组以橘皮竹茹汤为研究对象,在保持原方、原剂量、原煎煮方法、原适应症的基础上开展了该传统汤剂的质量表征方法研究。参照传统汤剂建立基准汤剂后,按照国家药品标准要求,并结合中药自身药效物质基础复杂多样和整体成分发挥作用的特点,建立指纹图谱整体控制结合多指标成分含量测定的质量表征方法,对标准颗粒的质量控制提供了技术支撑。橘皮竹茹汤出自《金匮要略》,处方中包括橘皮、竹茹、大枣、甘草、人参、生姜等六味药材,有着广泛的临床应用且疗效显著。现在已有公司着手开展橘皮竹茹汤颗粒的研发工作,但橘皮竹茹汤或其中成药于中国药典中未见记载,没有可以借鉴的物质表征方法或质控手段。本文在传统汤剂的基础上建立了保持原方、原剂量、原煎煮方法的基准汤剂制备方法。依原方记载,取橘皮15 g,竹茹15 g,大枣12.5 g,甘草6 g,人参3 g,生姜9 g,加水2000 m L,浸泡30 min,闭盖煮沸,开盖以武火煎煮浓缩至600 m L后停止煎煮,减重约1250 g。随后将汤剂冷冻并在真空中干燥得到总方冻干粉。为了避免样品中等极性部位化学成分的损失,对总方冻干粉选用了醇沉的方法进行处理处理。将总方冻干粉用75%乙醇处理后,得中等极性部位与多糖部位,为后续实验奠定了基础。随后将橘皮竹茹汤中等极性部位冷冻干燥后所得的冻干粉进行HPLC分析,对样品的前处理方法、流动相、柱温、梯度等条件进行了摸索,建立了橘皮竹茹汤中等极性部位的指纹图谱,对橘皮竹茹汤基准汤剂中等极性部位物质基础的整体评价。在得到橘皮竹茹汤指纹图谱后,通过将其与对照品溶液对照的方法对样品进行定性鉴别,推测出橘皮竹茹汤中等极性部位指纹图谱中的3个特征色谱峰,即橙皮苷、甘草苷、甘草酸。同时将橘皮竹茹汤HPLC图分别与其组方中各单味药HPLC图相比较,通过比对色谱峰的保留时间,推断出色谱峰的可能药材来源,并采用液相色谱串联质谱结合对照品对照的方法对橘皮竹茹汤中等极性部位样品中的物质基础进行了定性鉴别。对橘皮竹茹汤多糖部位,根据课题组多年经验采用“TFA全水解-PMP柱前衍生化”的方法对样品进行了前处理,并进行HPLC分析,得到了橘皮竹茹汤基准煎剂中多糖部位的指纹图谱,通过与标准单糖衍生物混合溶液的HPLC图进行比较,对指纹图谱全部9个特征峰进行指认。明确了橘皮竹茹汤多糖部位的单糖组成。本方法能够用来表征橘皮竹茹汤多糖部位物质基础。同时,也是对橘皮竹茹汤中等极性部位指纹图谱的有效补充。为进一步完善橘皮竹茹汤的质量表征方法,参考《中国药典》2010版后选取部分橘皮竹茹汤处方单味药中有专属性的活性相关成分为指标成分,有橙皮苷、甘草酸、人参皂苷Rb1、6-姜辣素。对橘皮竹茹汤总方冻干粉分别采用不同的适当方法进行前处理后,借助HPLC技术,建立了不同方法,从而对橘皮竹茹汤各指标成分含量进行测定,同时对各方法进行了方法学确证实验,结果表明这些方法可靠、适用。为保证基准汤剂研究用样品具有代表性,各单味药均由企业提供10批,且全部采用出自道地产地或主产区的药材,每种药材2-3个产地,每个产地至少3批,随机组合,制备10批研究用汤剂并用干膏率、指标成分的含量测定及转移率、指纹图谱相似度来表征关键质量属性,为其标准颗粒研发过程中工艺的研究提供参考依据。除以上工作外,作者还完成了部分甘草泻心汤化学成分表征的工作。甘草泻心汤出自《伤寒论》,由甘草、半夏、黄芩、黄连、人参、干姜、大枣七味中药组成。作者建立了该汤剂中甘草苷、黄芩苷和人参皂苷Rb1的含量测定方法,对其进行了方法学确证,并完成了不同批次甘草泻心汤中上述三种成分转移率的计算。本文首次建立了遵循原方、原剂量、原煎煮方法的橘皮竹茹汤基准汤剂的制备方法和橘皮竹茹汤中等极性部位的指纹图谱,结合实验室已有的成熟技术建立了橘皮竹茹汤多糖部位指纹图谱,较好地表征了橘皮竹茹汤的物质基础;为测定橘皮竹茹汤中各指标成分含量,建立了不同方法,并完成方法学确证研究;制备并测定了十批不同产地药材随机组合的基准煎剂样品的出膏率、指纹图谱相似度和指标成分含量,并计算指标成分转移率。同时,建立了甘草泻心汤中部分指标成分的含量测定方法,对其进行了方法学确证,并完成了不同批次甘草泻心汤中指标成分转移率的计算。该研究结果可作为工艺研究评价标准,全程指导工艺研究,确保标准颗粒与传统汤剂的一致性,为橘皮竹茹汤和甘草泻心汤现代化生产中的质量控制提供了帮助。