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异硫氰酸苄酯(Benzyl isothiocyanate, BITC)是异硫氰酸酯类化合物(Isothiocyanates, ITCs)的一种,在番木瓜种子中含量丰富,能够诱导包括乳腺癌、膀胱癌、前列腺癌、卵巢癌、白血病等多种肿瘤细胞的凋亡和周期阻滞,同时具有抑制肿瘤细胞侵袭和转移的作用。甲胎蛋白(a-fetoprotein, AFP)是肝癌细胞合成的特异性很高的蛋白质,在肝癌耐药中发挥重要的作用。本课题采用MTT、DAPI染色、流式细胞术、划痕修复、transwell侵袭和转移、脂质体转染、Western Blot、酶活性分析等方法,研究了BITC对肝癌细胞恶性行为的影响及AFP在其中发挥的功能和机制。研究结果显示：1、BITC能够抑制肝癌细胞Bel7402和HLE细胞增殖,引起Bel7402和HLE细胞形态变化,诱导Bel7402和HLE细胞凋亡及G2/M期周期阻滞,且均呈剂量依赖性。BITC通过诱导caspase-3酶活性的升高和抑制凋亡抑制蛋白Survivin的表达而诱导Bel7402和HLE细胞凋亡；通过下调Cyclin B1、CDK1、Cdc25c的表达以及提高p21和weel蛋白的表达诱导HLE细胞G2/M周期阻滞。2、干扰Bel7402细胞中的AFP表达能够增加BITC对其生长的抑制作用,增强BITC对其凋亡诱导作用和G2/M周期阻滞作用,在HLE细胞中过表达甲胎蛋白(alpha-fetoprotein, AFP)则能够降低BITC对其生长率的抑制作用,减少BITC对其凋亡诱导作用和G2/M周期阻滞作用。干扰Bel7402细胞中AFP的表达能够增强caspase-3的活性从而增强BITC的凋亡诱导作用,相反,在HLE中过表达AFP则能降低caspase-3的活性从而消弱BITC的凋亡诱导作用；干扰AFP表达导致p21表达上调及CDK1的表达下调而增强G2/M周期阻滞的程度,相反,过表达AFP则导致p21表达下调及CDK1的表达上调而消弱G2/M周期阻滞的程度。3、BITC通过降低基质金属蛋白酶MMP2、MMP9和CXCR4的表达及抑制MNP2、MMP9的酶活性而抑制Bel7402和HLE细胞的划痕修复、细胞迁移和细胞侵袭能力。4、干扰AFP表达导致PTEN表达上调,PI3K/AKT信号通路受阻,MMP2、MMP9、CXCR4的表达及MMP2和MMP9的活性受到进一步的抑制,从而导致对BITC诱导的迁移和侵袭的抑制作用进一步增强；相反,过表达AFP则导致PTEN表达下调,PI3K/AKT信号通路活化,MMP2、MMP9、CXCR4的表达及MMP2和MMP9的活性增强,从而导致对BITC诱导的迁移和侵袭的抑制作用被消弱。综上所述,番木瓜种子提取物BITC能抑制肝癌细胞的恶性行为,AFP可对抗BITC的作用；AFP可能是肝癌细胞恶性行为的重要分子。