【摘 要】
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为了进一步研究构成基因激活基质中基体材料对基因激活的影响,将广泛用于构建支架的生物活性玻璃作为研究对象,探讨其对基因转染的影响。本研究采用溶胶-凝胶法制备生物活性玻
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为了进一步研究构成基因激活基质中基体材料对基因激活的影响,将广泛用于构建支架的生物活性玻璃作为研究对象,探讨其对基因转染的影响。本研究采用溶胶-凝胶法制备生物活性玻璃溶胶,通过加入一定的粘结剂聚乙烯醇缩丁醛以调节溶液的粘度,再利用静电纺丝技术制备纤维状生物活性玻璃,通过调节制备过程中工艺参数,控制水/正硅酸乙酯的摩尔比为4~6、醇水体积比为3~5、溶胶陈化时间为1~3d、粘结剂聚乙烯醇缩丁醛的含量为3%~5%能得到节点少、尺寸均匀,直径为0.5~3μm的生物活性玻璃纤维。通过引入嵌段共聚物聚(乙二醇)-聚(丙二醇)-聚(乙二醇)可调节纤维内部孔径,当其含量为2.5%,聚乙烯醇缩丁醛含量为3%~5%时,能得到具有分级纳米孔的生物活性玻璃纤维。为了稳定目的基因并实时监测基因的表达情况,通过基因重组技术,构建了表达融合骨活素和绿色荧光蛋白的质粒,其能在真核细胞内自主复制并最终表达。将所制备的生物活性玻璃纤维用于基因转染研究,调整实验过程中各参数,通过控制操作过程中生物活性玻璃纤维含量约为1000μg/mL、质粒用量为4~8μg/mL、无血清培养基中共孵育30min~10h、加入转染样品的同时补充胎牛血清蛋白,可使得所作用的293T细胞具有较好的转染效率。这一转染特性主要归于生物活性玻璃纤维快速且大量释放Ca2+离子的能力,和能快速沉淀形成磷酸钙的能力,同时在形成磷酸钙的时候快速地载入质粒,从而起到了同磷酸钙基因转染体系相同的效果。同时,初步探索性地将生物活性玻璃纤维和脂质体-质粒共同转染MG63细胞,可见生物活性玻璃纤维在促基因转染和促成骨方面有较好的应用潜能。
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