【摘 要】
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目的:利用磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3（Glypican-3,GPC3）抗体与IRDye800CW荧光染料制作新型荧光靶向探针,对人离体肝癌组织进行荧光成像,探讨近红外荧光成像技术对肝癌GPC3表达程度的检测效率,以及荧光强度与肝细胞肝癌组织学特点及患者手术预后之间的关系。通过荧光靶向探针结合近红外荧光技术检测GPC3,为肝细胞肝癌的手术治疗及术后治疗提供一种新的参考依据。方法:选择西南医科大学附属医院
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目的:利用磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3（Glypican-3,GPC3）抗体与IRDye800CW荧光染料制作新型荧光靶向探针,对人离体肝癌组织进行荧光成像,探讨近红外荧光成像技术对肝癌GPC3表达程度的检测效率,以及荧光强度与肝细胞肝癌组织学特点及患者手术预后之间的关系。通过荧光靶向探针结合近红外荧光技术检测GPC3,为肝细胞肝癌的手术治疗及术后治疗提供一种新的参考依据。方法:选择西南医科大学附属医院行肝切除术的117例肝恶性肿瘤患者,使用GPC3-IRDye800靶向探针对离体肿瘤标本进行荧光靶向成像,浸泡浓度为10μg/ml,浸泡剂量10ml,浸泡时间5min,浸泡后用5-10ml胎牛血清洗脱未结合探针,再用磷酸盐缓冲溶液清洗,清洗后用近红外荧光设备照射组织,获得不同种类肝恶性肿瘤的近红外荧光图像。使用Envision免疫组织化学法检测肝癌组织中GPC3蛋白的表达水平,分析GPC3表达水平与荧光成像强度之间的关系以及荧光强度与HCC组织分化之间的关系。根据GPC3探针荧光强度将HCC患者分为强荧光组和弱荧光组,使用Kaplan-Meier法分析两组患者的无进展生存率和总生存率,并采用单变量和多变量Cox比例风险回归模型分析GPC3探针荧光强度对肝细胞肝癌患者术后无进展生存期的预测价值。同时,将HCC患者分为AFP升高组（>10ng/ml）和正常组（≤10ng/ml）,利用Kaplan-Meier法分别分析两组患者中不同荧光强度之间的无进展生存率差异。结果:117例肝恶性肿瘤组织经病理学验证分别为肝细胞肝癌87例、胆管细胞癌20例、转移性肝癌10例,免疫组化结果显示GPC3在肝恶性肿瘤中表达率为59.83%（70/117）,共有70例HCC组织标本表达GPC3,表达率为80.46%（70/87）,根据GPC3染色评分标准,GPC3在HCC组织标本中的高表达率为66.67%（58/87）。荧光成像结果显示,69例标本荧光显像,其中68例标本免疫组化结果为GPC3阳性,1例标本GPC3阴性;48例标本荧光未显像,其中46例标本免疫组化结果为GPC3为阴性,2例GPC3为阳性。GPC3荧光探针的敏感性为97.14%（68/70）,特异性为97.87%（46/47）。荧光成像对肝恶性肿瘤GPC3的检测结果与免疫组化结果基本一致（Kappa=0.964,P<0.01）,两者之间无明显差异（P>0.05）。荧光强度定量分析表示GPC3表达程度与荧光强度成正比（P<0.05）,拥有GPC3探针高荧光强度患者无进展生存期短于低荧光强度患者（7个月vs 13个月,P<0.05）。GPC3探针高荧光组和低荧光组的一年生存率分别为34.8%和63.4%,两者差异有统计学意义（P<0.05）。多变量分析确定GPC3探针荧光强度、微血管浸润以及分化程度是术后低无进展生存率的独立危险因素。在AFP阴性的肝细胞肝癌患者中,GPC3探针荧光强度与无进展生存期成反比（P<0.05）,AFP阳性组得到相似的结论。结论:利用GPC3特异性靶向探针,近红外荧光成像技术能准确可靠的检测出肝细胞肝癌GPC3的表达情况,GPC3探针荧光强度与GPC3组织表达程度成正比,同时高荧光强度也标志着HCC低分化程度;GPC3探针荧光强度也可作为HCC预后的独立指标,荧光强度与肝细胞肝癌患者术后无进展生存率和总生存率成反比;在血清AFP阴性的肝细胞肝癌患者中,GPC3探针荧光强度对其预后具有一定预测潜力。
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