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口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)是危害世界各国畜牧业的最严重疾病之一,对该病的控制,发达国家一般采用扑杀的措施消除疫情,而大多数发展中国家主要采取疫苗免疫和诊断检测等综合防制措施。目前用于口蹄疫的诊断技术中,酶联免疫吸附试验(ELISA)方法是最经济、有效的方法之一。传统ELISA方法以全病毒作为抗原检测抗体,而生产全病毒需要昂贵的培养基,且存在散毒的危险。因此,将口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)型特异性序列进行体外表达,用表达的产物作为检测用抗原就成为一种安全有效的方法。另外,把FMDV基因组中具有主要抗原位点的基因进行原核表达,表达产物纯化后用于疫苗研制,为今后亚单位疫苗的开发提供了基础。本研究在大肠埃希氏菌BL21(DE3)中分别表达了牛IFN-α、亚洲Ⅰ型FMDV VP1和VP1 C末端基因,并纯化了所表达的蛋白。用透析的方法进行蛋白复性后制成油乳剂疫苗,经皮下注射免疫小鼠,以MTT法检测小鼠脾淋巴细胞经植物血凝素(PHA)刺激后的增殖反应活性;以液相阻断ELISA检测血清FMDV特异抗体变化。结果发现,重组VP1(rVP1)和rVP1 C末端蛋白能单独诱发小鼠的体液免疫反应和微量的细胞免疫反应;用这两种蛋白分别与重组牛IFN-α(rBoIFN-α)共同接种小鼠,体液免疫反应和细胞免疫反应则更为明显。将口蹄疫病毒的VP1基因通过原核表达载体pPROex-HT在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达,获得大小为31KD的融合蛋白,经Western blot检测证实该表达蛋白具有良好的生物学活性。以纯化的融合蛋白为抗原建立了猪口蹄疫病毒VP1-ELISA检测方法,与国标试剂盒LPB-ELISA总符合率为96.25%,表明建立的VP1-ELISA检测方法具有很好的特异性和敏感性。