猪大肠杆菌亚单位疫苗的研究

来源 :中国农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:peng737
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本论文着重研究了北京地区猪致病性大肠杆菌菌毛及热敏感肠毒素的提取和纯化,并在此基础上研制出了大肠杆菌的菌毛、肠毒素亚单位疫苗,分别在实验室和临床上进行了免疫保护试验,主要研究内容和结果如下: 大肠杆菌菌毛的提取和纯化,将大肠杆菌K99菌株在改良明卡培养基上培养、收获,采用60℃水浴法提取菌毛,经硫酸胺沉淀和Sephadex G-100凝胶层析后,采用甘露糖抵抗血凝反应(MRHA)检测,获得纯化的菌毛蛋白。取纯化菌毛抗原与弗氏完全佐剂和矿物油佐剂,分别制成首免及加强免疫用疫苗,经3次免疫家兔后,血清抗体琼扩效价达1:16,表明提取的菌毛蛋白纯度高、免疫原性好。 兔回肠结扎试验(ligation of rabbit ileum,LRI)、兔皮肤兰斑试验(blue spot in rabbit skin,BSRS)和平板免疫溶血试验(plate immune hemolysis assay,PIHA)测定大肠杆菌热敏感肠毒素的比较,结果表明PIHA与LRI的LT检出率比BSRS明显提高,而且PIHA能同时测定十几个样品,大大提高了检测速度和效率。产生热敏感肠毒素的菌株经培养,收获、离心,硫酸胺沉淀、Sephadex-G100凝胶层析和平板免疫溶血试验检验,获得纯化的肠毒素蛋白,SDS-PAGE电泳表明,LT由2个分子量分别为12.5 KD和略大于25KD的蛋白组成。 取提纯的大肠杆菌K99菌毛和热敏感肠毒素用甲醛灭活,制成大肠杆菌亚单位油乳剂灭活苗,经无菌检验、安全检验,小鼠的免疫保护试验和疫苗保存期试验,表明疫苗的免疫性和安全性良好,在4℃条件下至少可以保存一年以上。 选取北京地区2个种猪场进行疫苗的免疫试验,试验分为3组,试验Ⅰ组,母猪产前5周和2周,分别肌肉注射大肠杆菌亚单位疫苗2ml。试验Ⅱ组,母猪产前2周,仔猪出生10日龄分别肌肉注射大肠杆菌亚单位疫苗2ml。对照组,母猪、仔猪均不接种疫苗。采用统计学方法判定疫苗免疫效果,结果表明,疫苗安全性良好,仔猪的发病率、死亡率在免疫组与对照组之间差异极显著(p<0.01),免疫组中,不同免疫方法,试验Ⅰ组与试验Ⅱ组之间差异不显著,不同猪场间疫苗的使用效果,仔猪发病率、死亡率无明显差异。
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