目的食管鳞癌是目前我国食管癌的主要类型,由于早期食管鳞癌的临床症状不典型且无早期的肿瘤标志物,多数患者确诊时已处于中晚期,迄今尚无针对食管鳞癌患者的靶向治疗药物,五年生存率仍较低。核酸适配体作为一种新型的靶向分子,已被证实其可作为细胞表面多种靶标的识别工具,且具有高特异性以及可修饰性。目前适配体已在多种肿瘤的体内外实验中成功用于靶向识别与干预。本研究拟通过细胞SELEX技术筛选出靶向结合食管鳞癌细胞KYSE-450的特异性核酸适配体,为食管鳞癌的靶向药物递送提供新策略。方法1.以HEEC细胞为反筛细胞,KYSE-450细胞为正筛细胞,利用CELL-SELEX技术筛选出对KYSE-450细胞结合性和特异性最佳的次级文库,期间加入内化筛选策略,并用荧光显微镜和流式细胞分析实时监测筛选进程,在确定最佳次级文库后进行TA克隆、高通量测序以及同源性分析,之后合成候选序列进一步筛选。2.通过荧光显微镜验证、流式细胞分析以及qPCR检测,筛选出结合性与特异性最高的序列,并进行亲和力测定和内化性能检测。3.利用荧光显微镜检测、流式分析验证适配体对其他食管鳞癌细胞,如Eca-109和TE-1细胞的结合性,同时用流式分析验证适配体对其他相关肿瘤细胞的结合性。结果1.经过18轮的CELL-SELEX筛选,获得了两条特异结合食管鳞癌细胞KYSE-450的核酸适配体,命名为A14和A24。2.亲和力测定发现,A14和A24对KYSE-450细胞的解离常数分别为108.4nM和51.32nM;共聚焦显微镜检测发现,A14和A24对KYSE-450细胞具有内化性能。3.适配体A14和A24对其他食管鳞癌细胞系ECA-109和TE-1细胞结合存在差异:A14、A24可以结合Eca-109细胞,但与TE-1细胞的结合则较弱,因此需进一步确定适配体与细胞结合的靶标;同时流式分析表明A14、A24对胃癌细胞、胃黏膜上皮细胞以及其他肿瘤细胞的结合性均较弱。结论经过18轮的CELL-SELEX筛选,获得了两条针对食管鳞癌细胞KYSE-450的特异性核酸适配体A14和A24,二者对KYSE-450细胞的解离常数分别为108.4nM和51.32nM,且经验证适配体A14和A24具备内化性能,同时适配体A14和A24亦能结合其他食管鳞癌细胞系如Eca-109细胞,但是A14和A24与KYSE-450、Eca-109细胞特异性结合的靶点性质尚未确定,仍需进一步研究。