【摘 要】
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目的:研究超声微泡破裂法对基因重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)质粒GV147-rhBMP2-GFP在大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的转染、表达的促进作用。方法:取8周龄Sprague-Dawley
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目的:研究超声微泡破裂法对基因重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)质粒GV147-rhBMP2-GFP在大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的转染、表达的促进作用。方法:取8周龄Sprague-Dawley雄性大鼠分离培养骨髓间充质干细胞(BMSCs),传至第3代时细胞悬液分为3组:A组(单纯细胞组),B组(质粒组,加入含目的基因质粒)及C组(微泡+超声+质粒组);转染后48 h用荧光显微镜观察转染情况及细胞生长状况,RT-PCR检测细胞转染后的目的基因表达情况,Western-blot检测目的蛋白翻译情况。应用SPSS13.0软件对实验数据进行统计学分析。结果:(1)转染48 h后可在倒置荧光显微镜下观察到B组及C组转染成功的细胞胞浆内发出绿色荧光,但A组未见明显绿色荧光表达,C组的绿色荧光表达量明显高于B组;(2)RT-PCR检测显示C组(微泡+超声+质粒组)BMP-2基因mRNA相对表达量较B组(质粒组)高;Western-bolt检测显示C组(微泡+超声+质粒组)BMP-2蛋白表达量较B组(质粒组)高。结论:超声微泡破裂法有助于提高外源性rhBMP-2基因在大鼠骨髓间充质干细胞转染率与表达水平,有望为骨折提供一种新型基因治疗方法。
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