研究背景 结直肠癌是最常见的消化道恶性肿瘤之一。在世界范围内，结直肠癌是第四位常见的恶性肿瘤。在美国是第三位最常见的癌症，位于癌症导致死亡原因的第二位。在我国，结直肠癌的发病率呈明显逐年上升的趋势，预料在未来二三十年内结直肠癌的发病率和死亡率将继续大幅上升，成为我国形势紧迫的肿瘤之一。因此，结直肠癌的早期诊断、早期治疗对提高患者生存率和生活质量具有十分重要的意义。 浸润和转移是引起结直肠癌患者死亡的主要原因。结直肠癌的生长、浸润和转移必须依赖肿瘤血管的生成。肿瘤血管生成受诸多血管形成相关因子的共同调控，包括血管生成刺激因子和抑制因子。VEGF是目前发现的肿瘤血管生成过程中作用最强、特异性最高的血管生成刺激因子，具有促血管内皮细胞增生和增强血管通透性的作用。PEDF是目前发现的抑制功能最强的一个内源性新生血管抑制剂，其直接作用于形成新生血管的内皮细胞，通过抑制内皮细胞有丝分裂，诱导内皮细胞凋亡来抑制新生血管的形成。通常情况下它们处于一定的平衡，任何原因引起血管生成因子的相对或绝对增多就会导致新生血管的生成。因此，保持血管生成调节因子之间的动态平衡，抑制肿瘤血管的生长，可以有效地控制结直肠肿瘤的生长、入侵和转移。近年来，有关血管生长调节因子在血管增生性疾病的发生过程中所起作用的研究较多，但有关在实体瘤中作用的研究则少有报道。 实时荧光定量PCR(Real-time FQ-PCR)是一种常用的荧光探针定量PCR方法，具有操作过程简单，特异性和灵敏度高等优点。目前该技术被广泛应用于医学和分子生物学等领域。本研究通过建立检测VEGF mRNA和PEDF mRNA的实时FQ-PCR的方法，了解结直肠癌组织及其远癌正常组织中上述两种血管生成调节因子的表达水平。这对于进一步研究VEGF和PEDF在结直肠癌的发生、发展中的作用，提高结直肠癌的诊断、疗效和预后判断具有十分重要的意义。 研究目的 研究结直肠癌组织及其远癌正常结直肠组织中VEGF mRNA和PEDF mRNA的表达水平，了解VEGF和PEDF的表达与结直肠癌各种临床病理特征之间的关系，探讨VEGF和PEDF在结直肠癌发生、发展过程中的作用。 研究方法 1．标本采集：收集39例结直肠癌患者的癌组织和远端正常结直肠组织，-80℃冻存。 2．建立检测VEGF mRNA和PEDF mRNA的Real-time FQ-PCR方法。 3．标本处理：提取样本总RNA，将总RNA逆转录成cDNA，再用FQ-PCR法对VEGFcDNA和PEDF cDNA进行定量。 4．数据分析：根据检测结果分析VEGF mRNA和PEDF mRNA在结直肠癌组织和远端正常组织的表达水平，以及在肿瘤组织中VEGF和PEDF与各种临床病理特征之间的关系；评价VEGF和PEDF在结直肠癌发生、发展过程中的作用。 研究结果 1．结直肠癌组织中VEGF mRNA的表达明显高于远端正常组织(P=0.002)；PEDFmRNA的表达明显低于远端正常组织(P=0.007)；VEGF/PEDF比值较远端正常组织升高了19.6倍。 2．伴随着淋巴结转移和浸润程深的加深，结直肠癌组织中7EGF mRNA的表达增加(P<0.01)，PEDF mRNA的表达减少(P<0.01)，差异有统计学意义：VEGF/PEDF比值明显升高。 3．随着Dukes分期越晚，结直肠癌组织中VEGF mRNA的表达增加(P<0.01)，PEDFmRNA的表达减少(P<0.01)，差异有统计学意义；C+D期较A+B期VEGF/PEDF比值升高了23.9倍。 4．随着结直肠癌组织分化程度越低，VEGF mRNA的表达增加，PEDF mRNA的表达减少(P<0.01)，VEGF/PEDF比值升高了12.1倍。 5．结直肠癌组织VEGF mRNA和PEDF mRNA的表达与患者的年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤的不同组织学类型无明显关系(P>0.05)。 研究结论 1．结直肠癌组织中VEGF mRNA的表达增加，PEDF mRNA的表达减少，VEGF/PEDF比值上升，提示VEGF和PEDF与结直肠癌早期血管生成密切相关。 2．VEGF和PEDF与淋巴结转移、结直肠癌的浸润深度以及结直肠癌的Dukes分期明显相关，提示VEGF和PEDF可能共同调节结直肠癌的发展和转移过程。 3．组织分化程度越低，VEGF表达上调，PEDF表达下调，表明两者的表达可预示结直肠癌恶性程度。 4．结直肠癌组织中VEGF促进血管生成的作用增强，PEDF的抑制作用减弱，两者之间的平衡被打破，导致了肿瘤组织血管的生成，促进了肿瘤的发生和发展，因此，VEGF和PEDF7可作为协助结直肠癌诊断、预后判断和疗效评价的重要指标。