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【背景】： 人类乳头状瘤病毒(HPV)感染是持续严重的全球性健康问题。高危型HPV已被公认是导致宫颈癌发病的最重要因素之一。除了宫颈癌，在食管癌、喉癌、卵巢肿瘤、乳腺癌、前列腺癌和膀胱癌中也检测到HPV病毒基因存在。但是HPV在肝癌中的感染情况却很少有文献报道。 【材料与方法】： (1)HPV18在HepG2细胞的整合鉴定。首先用免疫组织化学(IHC)Anti-Hepatocyte抗体鉴定HepG2为肝细胞。然后PCR扩增HPV18E6E7基因，PCR扩增产物经纯化回收后测序鉴定。荧光原位杂交(FISH)检测整合的原位信号，而Alu-PCR鉴定HPVE6E7整合的基因毗邻位点。 (2)整合的HPV18E6E7对HepG2细胞致癌机理及其信号通路。逆转录PCR(RT-PCR)和免疫印迹(Westernblot)分别检测E6和E7转录和翻译水平的表达。RNAi和基因芯片(RealTimePCRArray)来研究下调癌基因E7对肝癌细胞HepG2的增殖和凋亡的影响及可能的信号通路。针对HPV18E7基因编码区，设计并合成3对靶向的siRNA寡核苷酸(HPV18E7-63、HPV18E7-74和HPV18E7-112)。应用荧光标记的siRNA(FAM-siRNA)来检测序列的转染效率。对转染条件进行优化后，siRNA寡核苷酸经脂质体转染HepG2细胞，RT-PCR检测转染后E6和E7转录水平的表达情况。EdU染色法和AnnexinV-FITC/PI双染法检测转染后细胞的增殖和凋亡情况。构建pGPHI/GFP/Neo-shRNA载体并筛选单克隆细胞群。人细胞周期和凋亡信号通路基因芯片检测下调E7后增殖和凋亡相关基因的变化。 (3)HPV16/18在临床肝癌标本的感染情况。原位杂交检测肝癌组织芯片的HPV16/18的阳性率。 【结果】： (1)HPV18E6E7引物在预期位置(847bp)扩增出目的条带，测序结果与GenBank中HPV18(X05015)比对匹配率达99％。IHC表明HepG2细胞为肝细胞。FISH表明HepG2细胞中期和间期都有HPV18的原位杂交信号出现。 (2)RT-PCR和Westernblot证实HPV18E7在转录和翻译水平都有表达，而E6在转录水平有表达但蛋白水平表达较弱。荧光FAM-siRNA证实了转染效率可达90%。在三对siRNA序列中，HPV18E7-63和HPV18E7-112被证实有效。EdU染色法结果显示，实验组E7-siRNA转染48h，60h和72h后S期细胞分别为9.39%±3.55%,17.29%±5.85%和30.87%±4.26%，而对照组NC-siRNA分别为18.74%±6.66%,24.03%±5.35%和41.97%±8.73%(p＜0.05)。AnnexinV-FITC/PI双染法检测显示：实验组细胞组24h、48h和72h细胞的总凋亡率分别为7.26%±0.29%,22.03%±0.23%和19.20%±0.78%，与对照组细胞的总凋亡率5.25%±0.76%相比差异有统计学意义(p＜0.01)。RealTimePCRArray筛查出了相关基因的改变包括CyclinH,UBA1,E2F4,p53,p107,FASLG,NOL3和CASP14等。 (3)原位杂交筛查肝癌芯片标本为9%(9/100)的标本感染HPV16/18。 【结论】： 我们的研究发现HPVE6和E7基因能整合到人肝癌细胞HepG2中并且表达E6和E7癌蛋白。RNAi能抑制E6和E7的表达，抑制细胞的增殖和促进细胞的凋亡。虽然在100例肝癌肿瘤标本中有9例的HPV16/18阳性，但是HPV感染对肝细胞的致癌作用还需要进一步的研究证实。