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第一章DDX5的表达调控对ICC生物学特性的影响及其可能机制目的:探讨下调DDX5对肝内胆管癌(intrahepatic cholangiocarcinoma,ICC)RBE细胞的增殖、迁移、侵袭能力及其细胞周期的影响及其可能的分子机制。方法:DDX5-h RNA慢病毒转染ICC细胞株RBE,利用Western Blot实验检测慢病毒转染后RBE细胞中DDX5蛋白表达水平的变化,通过流式细胞仪和Alamar Blue法检测DDX5表达下调后对RBE细胞周期及增殖的影响。此外,采用划痕实验及Transwell侵袭实验检测DDX5对RBE细胞迁移和侵袭能力的影响,采用Western Blot实验检测DDX5表达下调后EMT相关分子的表达变化。结果:Western Blot法检测结果显示,DDX5-sh RNA组中RBE细胞中DDX5蛋白的表达水平较空白对照组及阴性对照组显著降低,提示DDX5-sh RNA转染能有效抑制RBE细胞中DDX5蛋白的表达。Alamar Blue实验检测结果显示,DDX5-sh RNA组在48小时所检测得到的细胞增值率均明显低于空白对照组及阴性对照组(P值均<0.05);划痕愈合实验显示,24小时后,DDX5-sh RNA组RBE细胞的迁移率明显低于空白对照组和阴性对照组(P值均<0.01);Transwell侵袭实验结果显示,DDX5-sh RNA组平均穿过膜的细胞数较空白对照组和阴性对照组明显减少,差异具有显著性(P值均<0.01)。流式细胞实验显示,DDX5-sh RNA1组和2组S期细胞所占百分比明显高于空白对照组和阴性对照组,与之对应的G0/G1、G2/M期比例相应降低,细胞阻滞在S期(P值均<0.05)。Western Blot法研究结果显示,EMT分子vimentin、SNAIL及EGFR水平在DDX5-sh RNA细胞中的表达水平不同程度下降。结论:DDX5表达下调能抑制ICC RBE细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并阻滞细胞生长周期于S期;DDX5可以通过EMT机制影响ICC的生物学特性。第二章DDX5在ICC免疫病理学诊断和临床预后评估中的意义目的:检测ICC组织中DDX5的表达情况,验证DDX5在ICC的诊断及鉴别诊断中的价值,并探讨DDX5的表达水平与ICC临床病理参数及预后之间的相关性。方法:收集2000年7月至2006年3月间我院手术切除并病理诊断为ICC的病例323例。通过查阅电子和纸质版病例档案,收集患者的年龄、性别、肿瘤大小、数目、有无肝硬化、有无微血管癌栓、TNM分期等病理资料。另取癌旁正常组织作为对照。将统计完整的病例录入Microsoft Excel并建立数据库,以此数据库为基础,利用SPSS 19.0分析比较DDX5的表达水平与ICC临床病理参数之间的相关性,并对323例ICC预后进行评估。结果:DDX5阳性染色呈棕褐色或棕黄色,主要表达于癌细胞核及细胞质。323例ICC组织中170例DDX5表达阳性,阳性率为52.6%。DDX5在ICC组织中的表达水平明显高于正常胆管组织,统计结果有显著差异(P<0.05)。对4类病变进行免疫组化分析,结果显示,高级别上皮内瘤变组织中DDX5的阳性率为40%(4/10),假腺管型肝细胞癌组织中DDX5的阳性率为0%(0/10),肝内转移性腺癌组织中DDX5的阳性率为50%(5/10)。ICC组织中DDX5的表达量与患者性别、血清ALP值有关(P<0.05),但与患者的年龄、肝硬化情况、肿瘤大小、TNM分期等无关(P>0.05)。DDX5高表达组的总生存期(overall suvival,OS)明显差于低表达组(P=0.011),但与复发时间(time to recurrence,TTR)无关(P=0.555)。结论:DDX5作为ICC的一个新型肿瘤标志物,在ICC的诊断与鉴别诊断,以及评估ICC患者术后生存状况具有较大的实际应用价值。