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目的:尿酸是核酸分解代谢及高嘌呤食物摄入,内外源性相互作用相互影响的结果,尿酸在肾脏(90%)、肠道(10%)完成终末代谢。相比较灵长类动物而言人类因缺乏尿酸酶,常常出现高尿酸血症。高尿酸血症导致的肾脏病理生理改变,并非全部归结于尿酸盐的沉积,一方面高尿酸本身可以引起内皮细胞部分信号通路损伤,导致一氧化氮产生减少,另一方面尿酸参与炎性反应,上调炎性因子表达,导致脂质氧化,如何降低内皮细胞的氧化应激及炎性因子作用成为近年来研究热点,银杏叶提取物是将银杏有效成分加以提纯和分离,其有效成分可以分为两大类,银杏内酯及银杏黄酮,银杏内酯具有高度抗血小板活化功能,银杏黄酮在清除氧自由基及抗氧化方面发挥作用,近年来,银杏叶提取物在治疗心脑血管疾病领域发挥功效。本研究通过探讨银杏叶提取物对不同尿酸浓度肾小球内皮细胞AMPK、AKT及eNOS表达及ICAM-1、MCP-1炎性因子表达,探讨银杏叶提取物在参与内皮细胞氧化应激的作用,改善高尿酸血症患者肾脏内皮细胞功能,拓宽其使用范围。方法:1、设计研究对象,选取人的肾小球内皮细胞(HRGEC)为实验对象,经过HRGEC经过不同浓度尿酸(0mg/dl、4mg/dl、8mg/dl、16mg/dl)干预24小时后观察细胞形态变化,选择0mg/dl尿酸组为对照组,4mg/dl为正常浓度尿酸组,8mg/dl尿酸组、16mg/dl尿酸组为高浓度尿酸组,8mg/dl尿酸组+银杏叶提取物干预、16mg/dl尿酸组+银杏叶提取物干预为实验组。2、使用银杏叶提取物(10ul/ml)分别作用于不同尿酸浓度的HRGEC 24小时,通过Real-time PCR及CCK-8细胞毒性实验检测尿酸培养基及银杏叶提取物对肾小球内皮细胞毒性。3、银杏叶提取物作用于8mg/dl、16mg/dl尿酸组24小时,Real-time PCR法、Western blotting法检测AMPK、磷酸化AMPK、AKT、磷酸化AKT、e NOS m RNA及蛋白水平定量表达。4、利用Real-time PCR检测ICAM-1及MCP-1 m RNA在不同尿酸浓度HRGEC中的表达,以及通过银杏叶提取物干预后前后变化。结果:1、通过倒置显微镜观察细胞形态及增殖结果,一般浓度尿酸组(4mg/dl)经过24小时培养后,细胞形态正常,可见细胞呈现圆形、卵圆形与对照组无显著差异,高浓度尿酸组8mg/dl及16mg/dl经过24小时干预后,细胞形态萎缩,部分细胞融合坏死,细胞培养基浑浊,且HRGEC生长状态不良,可见裂隙,甚至有细胞脱落现象。使用浓度为10ul/dl银杏叶提取物干预24小时,通过显微镜观察,高浓度尿酸组经过银杏叶提取物干预后细胞萎缩、变形情况较前改善。2、通过Real time PCR及Western blotting检测AMPK、AKT及e NOS m RNA及蛋白水平,4mg/dl尿酸组的AMPK、AKT、e NOS表达与对照组比较无显著差异(P>0.05),高浓度尿酸组(8mg/dl及16mg/dl)磷酸化AMPK与总AMPK的比值较对照组表达明显下降,存在统计学意义(P<0.05);磷酸化AKT与总AKT的比值较对照组表达明显下降,存在统计学意义(P<0.05)。8mg/dl及16mg/dl尿酸组HRGEC的e NOS的表达较对照组表达明显下降,存在统计学意义(P<0.05),银杏叶提取物干预后高浓度尿酸组(8mg/dl及16mg/d)HRGEC AMPK、AKT及e NOS表达相比干预前出现上升趋势,存在统计学意义(p<0.05)。3、经过Real time PCR检测,与对照组比较,一般浓度尿酸组(4mg/dl)的ICAM-1及MCP-1 m RNA表达无显著差异(P>0.05),高浓度尿酸组(8mg/dl及16mg/dl)HRGEC的ICAM-1及MCP-1 m RNA表达较对照组表达明显增加,存在统计学差异(P<0.05),8mg/dl及16mg/d尿酸组经过银杏叶提取物干预后对比干预前呈现明显下降(p<0.05)存在统计学意义。结论:1、高浓度尿酸激活AMPK、AKT、e NOS经典信号通路使肾小球内皮细胞产生NO减少,因为NO抗氧化应激改善内皮功能,NO产生减少造成肾内皮细胞进一步损伤。2、银杏叶提取物能有效改善高浓度尿酸状态下的AMPK、AKT、e NOS表达,从调控信号通路途径,改善高尿酸对肾小球内皮细胞的损害。3、银杏叶提取物能有效降低高尿酸状态下的ICAM-1及MCP-1 m RNA表达水平,减少炎性因子对肾小球内皮细胞损害。