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目的1．观察人参皂甙Rg1对体外培养神经干细胞增殖分化作用的影响。2．观察人参皂甙Rg1对缺血后脑组织神经干细胞功能的促进作用。3．探讨通过利用人参皂甙Rg1促进缺血后脑组织神经干细胞增殖分化达到治疗缺血性脑血管病目的的可能性。方法1．新生Wistar大鼠40只，每次各取2只分别用来进行以下四个方面的实验观察：神经干细胞原代培养、人参皂甙Rg1(浓度为60mg／L)诱导神经干细胞增殖、不同浓度的人参皂甙Rg1(40mg／L、80mg／L和120mg／L)对神经干细胞增殖作用的影响和不同浓度的人参皂甙Rg1(20mg／L、40mg／L和80mg／L)对神经干细胞分化作用的影响。均取皮质及海马组织作为实验材料，利用无血清培养技术体外培养神经干细胞，并对神经球形成数进行计数及进行MTT比色分析。神经干细胞增殖及分化后，采用免疫组织化学及免疫荧光技术鉴定神经干细胞的特异性抗原标志物巢蛋白(nestin)表达及神经干细胞分化为神经元(NSE阳性细胞)、星形胶质细胞(GFAP阳性细胞)和少突胶质细胞(GalC阳性细胞)的情况，并用5-溴脱氧尿苷(BrdU)标记增殖的神经干细胞，观察神经干细胞增殖情况。2．将成年Wistar大鼠60只随机分为假手术组、单纯缺血组和人参皂甙Rg1治疗组，每组20只。用线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型，采用Hata评分法评价各组神经功能缺损程度。经腹腔注射BrdU(50mg／kg，每4h一次，共4次)标记处于增殖状态的神经干细胞，用免疫组织化学及双标免疫荧光技术观察人参皂甙Rg1对局灶性脑缺血后1d，3d，7d及14d时脑组织BrdU、nestin、NSE和GFAP阳性细胞以及nestin／BrdU、NSE／BrdU及GFAP／BrdU双标阳性细胞的影响，进行细胞计数，并作student’ st检验或单因素方差分析，确定人参皂甙Rg1对局灶性脑缺血大鼠脑组织神经干细胞功能的促进作用。结果1．从新生大鼠皮质及海马成功分离培养出神经干细胞并进行传代和分化。2．在基础培养基中加入60mg／L的人参皂甙Rg1后能够促进神经干细胞的增殖。在同等接种密度条件下，正常神经干细胞培养基中加入浓度为40mg／L和80mg／L的人参皂甙Rg1形成的干细胞球数较对照组多，且神经球体积增大。MTT比色法检测细胞活性A值显著高于对照组。而浓度为120mg／L的人参皂甙Rg1组没有悬浮球形成，可见细胞大多死亡。3．去除正常培养基中bFGF和EGF，加入10％胎牛血清(FBS)使神经干细胞进入分化期后，添加人参皂甙Rg1组表达nestin抗原的细胞数较对照组明显减少，NSE、GFAP和GalC的阳性细胞表达增多。说明人参皂甙Rg1也能促进大鼠皮质及海马源性神经干细胞的分化。而且人参皂甙Rg1对神经干细胞向神经元分化作用呈一定程度的剂量依赖性。4．利用线栓法成功制作了局灶性大鼠脑缺血模型。5．预先用人参皂甙Rg1后，模型大鼠神经功能缺损症状获得改善。6．预先用人参皂甙Rg1后，脑缺血后脑组织nestin、BrdU、NSE、GFAP阳性细胞，以及nestin／BrdU、NSE／BrdU和GFAP／BrdU双标阳性细胞较对照组明显增多，分布范围扩大，差异有统计学意义。结论1．本实验结果显示人参皂甙Rg1对体外培养的神经干细胞有促进增殖和定向分化的作用。2．人参皂甙Rg1对局灶性脑缺血大鼠神经功能缺损症状有改善作用。3．人参皂甙Rg1能诱导局灶性脑缺血大鼠脑组织神经干细胞增殖及定向分化。提示人参皂甙Rg1具有促进局灶性脑缺血大鼠脑组织神经干细胞功能的作用，为治疗缺血性脑血管病奠定了理论基础。