酒窖底泥中丁酸梭菌的分离及特性研究

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丁酸梭菌即酪酸梭菌,是存在于人和畜禽肠道的一种厌氧有益菌。它能形成内生芽孢,具有耐高温、耐酸、耐胆酸盐、耐部分抗生素等特性,作为饲料添加剂和兽药,与非芽孢类活菌制剂相比优势显著。 本研究从酒窖底泥中筛选到一株具有优良益生特性的丁酸梭菌B1,研究了其生长特性、应用特性和发酵生产工艺,断奶仔猪饲喂实验验证了其防病促长效果。具体研究结果如下: (1) 通过厌氧培养法从酒窖底泥中分离得到14个菌株,生理生化实验和16SrDNA序列分析鉴定出两株丁酸梭菌。选取丁酸梭菌菌株B1研究了其生长特性和安全性,体外研究表明其具有较强的耐酸、耐胆汁和耐抗生素能力,并能显著抑制常见肠道致病菌的生长,具有作为饲用微生态制剂应用的潜力。 (2)对于酸梭菌的培养条件进行了优化,得到优化后的丁酸梭菌发酵培养基为:葡萄糖2%(w/v),大豆饼粉4.5%(w/v),硫酸铵0.1%(w/v),NaHCO<,3>0.124%(w/v),玉米粉0.7%(w/v),MIISO<,4>.H<,2>O 0.02%(w/v),MgSO<,4>.7H<,2>O0.02%(w/v),CaCl<,2> 0.002%(w/v),初始pH为7.5。 (3)在优化培养基的基础上进一步研究了发酵工艺对发酵菌数的影响,发现接种量为5%,初始pH为7.0、培养时间为48 h及加热菌种有利于提高发酵菌数,按此方法发酵菌液菌数可达4.0x1.0<8> CFU/mL。而通过控制pH值恒定在pH6.5,发酵菌数可达2.0x10<9> CFU/mL,说明丁酸梭菌生长繁殖受自身产酸抑制严重。 (4)对于酸梭菌的干燥工艺进行了摸索。发现喷雾干燥法干燥时菌体死亡率过高,而用烘箱在低于55℃低温烘干时可以保持较高的菌体存活率。 (5)进行仔猪饲喂试验,初步验证了其防病促长效果。
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