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MicroRNAs (miRNAs)是一类大小约21-23个碱基的非编码单链小分子RNA,(?)和靶基因mRNA的3’UTR结合,通过降解其(?)nRNA或抑制其翻译而下调靶基因表达,参与调控细胞增殖、凋亡和免疫防御等生理过程,在肿瘤和病毒感染等病理过程中发挥重要作用,并在疾病检测、预防和治疗等方面具有广阔的应用前景。肝细胞肝癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,HBV感染是我国肝癌发生发展的重要致病因素。HBV编码的乙型肝炎病毒x蛋白(HBx)在HBV相关肝癌的发生、发展、转移中具有重要作用。DNA甲基转移酶(DNMT1)为miR-152的重要靶基因之一,miR-152能结合于DNMT1的3’UTR而下调其表达。最新研究发现,HBX能下调miR-152,而miR-152的下调可致其靶基因DNMT1mRNA和蛋白水平表达上调,进而导致GSTP1和E-cadherin等抑癌基因DNA甲基化增加而促进肝癌发生。另有研究发现,miR-152表达的改变是影响细胞周期的一个重要因素,miR-152下调后促使S期和G2/M期细胞相对比例增加。Wnt/β-catenin信号途径活化在胚胎发育、细胞增殖和肿瘤发生过程中发挥重要作用。研究发现,Wnt-1蛋白在HBV和HCV感染相关性HCC中表达上调。HCV核心蛋白可通过上调Wnt-1的表达促进肝细胞增殖；HBX是Wnt/β-catenin信号通路必要的激活剂。进一步软件分析发现Wnt-1基因3’UTR存在miR-152潜在的结合位点,miR-152可能调控Wnt-1基因的表达。但关于HBV感染过程中HBX是否通过下调miR-152促进Wnt-1蛋白表达而在肝细胞增殖、肝癌发生发展中起重要作用尚不清楚。本实验旨在通过Adeasy系统构建HBX重组腺病毒载体,感染HepG2细胞,观察HBX能否通过下调miR-152调控Wnt-1基因,进一步引起细胞增殖而促进肝癌发生。利用Adeasy系统构建HBX重组腺病毒载体,以不同的感染复数感染HepG2细胞48h后,通过real-time PCR, Western-blot验证HepG2田胞内HBX mRNA和蛋白的表达情况；HBX重组腺病毒以最佳感染复数感染HepG2田胞48h后,通过real-time PCR, Western-blot,流式细胞术观察HBX对miR-152, Wnt-1及细胞周期的调控；rniR-152inhibitor转染HepG2细胞48h后通过real-time PCR、Western-blot、流式细胞术分别观察miR-152inhibitor对Wnt-1表达及HepG2细胞周期的调控。研究结果显示：腺病毒HBX感染后可下调HepG2细胞内miR-152水平,上调Wnt-1基因的mRNA和蛋白水平；同时使HepG2(?)胞G1期细胞比例明显减少,S期细胞比例显著增加；miR-152inhibitor作用后可促进Wnt-1mRNA和蛋白水表达,并导致HepG2细胞的G1期细胞比例明显减少,S期细胞比例显著增加。结论：HBX通过对miR-152-wnt-1的调控作用在致肝癌细胞增殖中发挥重要作用,为HBV感染相关性HCC发生机制的阐明提供了重要思路。