樱桃叶中黄酮类化合物成分的研究

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樱桃叶为蔷薇科(Rosaceae)李属(Prunus)植物樱桃(Prunus pseudocerasusLindl.)的叶片。樱桃在中国种植广泛,主要分布在河北、陕西、甘肃、山东、山西、江苏、江西、贵州和广西。樱桃叶作为樱桃的主要副产品,其降低血压的功能已被证实,对于其中的黄酮类化合物的研究,已经见报的较为少见。黄酮类化合物是已被证实的优良的抗氧化剂,同时其清除自由基的效果显著,在保健营养品、药品中已广泛使用。课题研究由四部分组成:(1)选择微波辅助提取法提取樱桃叶中的黄酮类化合物,对影响樱桃叶总黄酮的提取条件的因素进行探讨。实验结果表明,最佳工艺条件为:微波时间5min、功率300W、75%乙醇、料液比1:25(g/mL)、提取温度80℃。(2)以樱桃叶总黄酮的吸附率和解吸率为指标,采用静态吸附解吸法确定出合适的大孔吸附树脂;动态吸附与解吸法确定纯化条件,分析了样品液pH、吸附流速以及洗脱液浓度、洗脱流速、洗脱液用量对动态纯化的影响;同时采用高效液相色谱法进行分析检测以表征纯化效果。实验结果表明,大孔吸附树脂D101对樱桃叶总黄酮有很好的吸附解吸性能,其动态纯化工艺条件为:樱桃叶总黄酮样品液浓度1.0mg·mL-1、pH=4,吸附容量为17.34mg·g-1干树脂,吸附流速2BV/h,70%乙醇3倍柱体积以2BV/h的速度,可充分洗脱吸附在大孔树脂上的黄酮,纯化后樱桃叶黄酮纯度提升到74.29%,约为纯化前的3倍。(3)采用高效液相色谱-质谱联用技术对樱桃叶成分进行分离鉴别,流动相为0.1%甲酸水溶液-甲醇溶液梯度洗脱,在ESI负离子模式下采集数据,对照标准品推断出樱桃叶中的九种成分,其中包括七种黄酮类化合物,同时探讨了樱桃叶成分的电喷雾/串联质谱的裂解方式,所建立的高效液相色谱-质谱法快速有效,可以用于高效鉴定樱桃叶中的主要成分。(4)通过测定樱桃叶中的黄酮类化合物对卵黄脂蛋白过氧化的抑制能力;对DPPH自由基、羟自由基(·OH)、超氧阴离子自由基的清除能力;以及总的抗氧化能力来评定樱桃叶中的黄酮类化合物的抗氧化性。与常见的水溶性抗氧化剂Vc做对比,客观评定樱桃叶中的黄酮类化合物清除自由基及抗氧化的能力。实验结果显示:樱桃叶中的黄酮类化合物的抗氧化效果是极为显著的,在适当的浓度范围内,樱桃叶中的黄酮类化合物对羟自由基(·OH)的清除以及对卵黄脂蛋白过氧化的抑制能力强于Vc,但是在总抗氧化活性和清除DPPH自由基、超氧阴离子自由基方面稍逊色于Vc。
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