微生物农药已经广泛应用于植物病害的防治,目前很多研究者都把研究目标集中在生防菌与病原微生物互作方面。然而,生防菌对土壤真菌群落的影响与评价的报道相对较少。本文综合了稀释平板法、T-RFLP方法、PCR-DGGE技术、焦磷酸测序技术,探索了已在我国登记和商品化应用的生防菌P.fluorescensCPF10对西瓜根围土壤真菌群落结构的影响,为生防菌施入土壤微环境的安全性提供技术支持。通过对荧光标记生防菌的回收,发现生防荧光假单胞菌CPF10施入田间后,由原来107CFU/g干土降到了105CFU/g干土,第7周之后维持在103CFU/g干土左右,CPF10在土壤中的生存能力要比土著真菌低得多(103CFU/g干土)。通过系列稀释培养计数法研究了施入生防菌CPF10后对土壤可培养真菌的影响,发现施入生防菌前两周,明显促进可培养真菌的生长,但生防菌定殖后,CPF10对土壤可培养真菌数量上有抑制作用,这种抑制作用维持四周左右,第7、8周后与对照趋于一致。使用限制性内切酶HINFⅠ和Taq Ⅰ酶切,分析T-RFLP的主成分,从施入生防菌第1周开始,生防菌处理和对照差别很大,这种差异一直持续到第7周,而且第7周差异最为明显。第8周结果显示生防菌处理组中真菌群落与对照差异减小。第9周两组真菌群落结构趋同。通过PCR-DGGE分析,发现生防菌CPF10对西瓜根围土壤土著真菌的影响持续七周。七周后,生防菌对西瓜根围土壤真菌群落的影响明显减弱。施入生防菌CPF10第3到6周,优势菌群球腔菌属Mycosphaerella、链格孢属Alternaria、镰刀菌属Fusarium、烧瓶状霉属Lecythophora、毛壳菌属Chaetomium等的丰度会有所降低,尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum、被孢霉属Mortierellaceae、海洋耐盐真菌Wallemia sebi和不可培养的土壤接合菌Z(?)ygomycete变化最为剧烈,而到第7、8周后,这些菌群开始恢复。巢式PCR-DGGE结果显示,生防菌施入西瓜根围土壤后,对土壤菌根真菌的影响相对土著真菌来说比较小,施入生防菌前三周,处理与对照的DGGE图谱极为相似,生防菌对土壤菌根真菌的影响很小。但施药第4周到第7周,生防菌对菌根真菌反而有促进作用,维持三周左右,这些丛枝菌根真菌经NCBI的Genbank比对后,绝大部分属于球囊菌属Glomus,到第8周这种促进作用消失。454焦磷酸测序技术结果发现在施入生防菌的第7周真菌菌群丰度和多样性显著增加。高温条件下,整个真菌可培养真菌数量降低,生防菌成为土壤菌群内的优势菌,因而更容易发挥生防作用,炭疽菌属Colletotrichum、小丛壳菌属Glomerella、小球腔菌属Leptosphaeria、丛赤壳属Nectria、黑座菌属Valsa (?)(?)轮枝孢属Verticillium等植物病原菌消失,生防效果显著。优势菌裸胞壳属Emericella大幅度降低,变化剧烈,非优势菌属石蕊属Cladonia、炭角菌属Xylaria和根生壶菌属Rhizophydium等土壤有益菌数量激增,变为优势菌群。综上所述,生防菌P. fluorescensCPF10的引入对土壤真菌群落的干扰相对于气候,植物生长阶段、生态微环境而言,影响是短暂的,尤其是对丛枝菌根真菌的影响只有3周左右,可见生防菌P. fluorescensCPF10具有较好的生态安全性。本研究利用传统培养法与T-RFLP、DGGE、焦磷酸测序等分子生物学技术相结合综合详细地评价了生防菌对土壤微生态的影响,形成了新颖有效的微生物农药安全评价体系。