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慢性重型乙型肝炎(Chronic severe hepatitis B, CSHB)是在慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B, CHB)基础上出现肝细胞大量炎性坏死引起的肝衰竭,又称为慢加急性肝衰竭(acute-on-chronic liver failure),发病凶险、病情危重,抢救治疗难度大,可引起各种并发症,死亡率高。慢性重型乙型肝炎发病是病毒和机体两方面相互作用失衡的结果,但具体机制尚未阐明。乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)的前C/基本核心启动子(basal core promoter, BCP)区变异可以影响病毒e抗原(HBeAg)和病毒的复制力,有研究者认为与慢性乙型肝炎的重症化相关,但也有不同的结果。由于以往研究的样本量较小(均小于70例)和方法的敏感性不够,得出的结论难以明确。本实验的目的是通过大样本分析CHB和CSHB患者样本,明确HBV前C/BCP区变异特点,并分析这些位点变异对乙型肝炎重症化的影响。研究方法为提取患者血清DNA,用自己建立的巢式PCR方法扩增目标基因片段,PCR产物纯化后直接测序,分析了10个热点变异位点的点突变及其插入/缺失变异情况,并进行统计学分析,比较这些变异对病情的影响。本研究的主要结果如下:1.建立了敏感可靠的巢式PCR方法,敏感度较文献报道的常规方法提高了100倍以上,达到103拷贝/ml。2.成功扩增并测序分析了399例慢性乙型肝炎轻中度、211例慢性乙型肝炎重度和348例慢性重型乙型肝炎患者的HBV前C/BCP区基因序列。3.分析表明,慢性重型乙型肝炎患者HBV前C/BCP区发生突变频率显著高于慢性乙型肝炎,尤其是A1762T、G1764A和G1896A位点突变比较常见;慢性重型乙型肝炎患者中除了常见的点突变形式外,缺失/插入突变情况也较多;HBeAg阴性的CSHB患者比CHB患者多,提示HBV前C/BCP区突变引起的HBeAg阴转或表达水平下降可能与免疫损失增强相关。4.单独比较A1762T+G1764A和A1762T+G1764A+G1896A联合突变在不同病情患者中的差异发现: A1762T+G1764A和A1762T+G1764A+G1896A联合突变情况在HBeAg阴性不同病情患者中有统计学差异,随着病情的发展,两种联合突变的百分率增加。5. A1762T+G1764A和A1762T+G1764A+G1896A联合突变时,HBeAg阴性不同病情患者的HBV DNA载量有统计学差异,CHB重度患者的HBV DNA载量大于CSHB患者, CSHB患者大于CHB轻中度患者;A1762T+G1764A和A1762T+G1764A+G1896A联合突变时,B和C基因型在不同病情中差异显著,随着病情的发展,B基因型有增加的趋势。总之,本研究通过对CSHB与CHB轻中度和CHB重度患者HBV前C/BCP区的变异分析,明确了该区变异与乙肝重症化的发生相关,研究结果有助于阐明乙型肝炎重症化的发生机制,并对乙肝重症化的临床预警分析有积极意义。