人前列腺间充质干细胞的分离、鉴定与基因表达研究

来源 :内蒙古医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:luoxuefubai
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目的:  1、本研究从人前列腺组织中分离、培养人前列腺间充质干细胞(Human prostate-derived Mesenchymal Stem Cells,hPMSCs),建立hPMSCs体外分离培养技术体系;从人脂肪组织中分离、培养人脂肪间充质干细胞(Human adipose-derivedmesenchymal stem cells,hADMSCs),将其作为对照组细胞。  2、通过流式细胞仪和免疫荧光法检测hPMSCs的表面标志物,在条件培养基中诱导hPMSCs向成骨、成脂、成软骨细胞诱导分化,初步了解hPMSCs的生物学特性。  3、以高通量转录组测序分析hPMSCs与hADMSCs的差异表达基因,从分子水平研究hPMSCs的基因表达。  方法:  1、利用胶原酶消化法,从人前列腺组织中分离出人前列腺单核细胞,通过免疫磁珠分选技术(Magnetic-Activated Cell Sorting,MACS)高效分选hPMSCs,使用MEMɑ+10%FBS培养基培养hPMSCs;从人脂肪组织中利用胶原酶消化法分离、培养及扩增hADMSC,作为对照组。  2、将分离、培养的hPMSCs与hADMSCs利用流式细胞仪与免疫荧光法鉴定其表面抗原标志物、在条件培养基中对其进行成脂、成骨、成软骨定向诱导分化。  3、利用Illumina测序平台对hPMSCs与hADMSCs进行单细胞转录组测序,并对测序数据进行比较分析。  结果:  1、成功分离、培养了hPMSCs与hADMSCs,两者细胞形态相似,均类似于成纤维细胞,细胞增殖速度快,体外能传代培养40代。  2、通过流式细胞仪和免疫荧光法检测出hPMSCs具有目前公认的间充质干细胞(mesenchymal stells,MSCs)免疫表型,表达CD271、CD73、CD90、CD166、CD49d、CD44和Vimentin,不表达CD105、CD34、CD45、CD133,通过条件培养基定向诱导hPMSCs为脂肪细胞、成骨细胞、成软骨细胞;通过流式细胞仪和免疫荧光检测出hADMSCs表达CD73、CD90、CD105、CD44和Vimentin,不表达CD34、CD45、CD49d,通过条件培养基定向诱导hADMSCs为脂肪细胞、成骨细胞、成软骨细胞。  3、hPMSCs与hADMSCs进行测序比对分析后有显著差异基因表达;其中表达上调的基因有5,520个,表达下调的基因有4,645个;上调基因中:TPM1、FDFT1、THBS1、DSTN与细胞增殖相关,IFI6与细胞抗凋亡相关,CD63与抑制肿瘤相关,下调基因中:CCNG1、EGR1、MGP与致癌相关。  结论:  1、利用胶原酶法与免疫磁珠分选法可高效分离、富集hPMSCs。  2、实验证明体外分离、培养的hPMSCs具有间充质干细胞的性质。  3、hPMSCs与hADMSCs进行测序比对分析后基因表达有显著性差异;其中表达上调的基因有5,520个,表达下调的基因有4,645个。
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