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目的:应用分子生物学技术检测不同胸腺组织中AIRE、FEZF2、FOXP3及ACHRαm RNA及相应蛋白的表达量,探讨AIRE、FEZF2、FOXP3、ACHR与MG发病的关系。方法:1.收集2016年1月-2018年12月就诊吉林大学第一医院胸外科行胸腺占位切除,且术后病理诊断为胸腺瘤的患者。依据重症肌无力诊断标准对患者进行分组:MG+胸腺瘤组(MG-associated thymoma group,MG-T)、单纯胸腺瘤组(non-MG-associated thymoma group,NMG-T)、正常胸腺组(healthy control group,HC)。MG-T组为合并MG的胸腺瘤患者;NMG-T组为单纯胸腺瘤、术前及术后随访6月均无MG及其他自身免疫性疾病发生者;HC为心脏外科患者手术中为暴露心包而切除的胸腺组织(排除急性感染者),所有患者均签署了知情同意书,且通过了伦理委员会审核。2.应用免疫荧光技术检测AIRE、FEZF2在胸腺内的表达部位。3.采用RT-PCR检测不同组间胸腺内AIRE、FEZF2、FOXP3及ACHRαm RNA的表达。4.应用免疫组化技术检测MG-T组与NMG-T组胸腺内AIRE、FEZF2、FOXP3及ACHR蛋白的表达。5.应用ELISA技术检测MG-T患者及部分NMG-T患者血清中Ach R-Ab量。结果:1、MG-T组共17例,其中男性6例,女性11例,年龄45±13岁。胸腺病理类型根据WHO胸腺肿瘤国际组织学分类进行分型,其中AB型5例,B2型12例。根据Osserman分型评价MG临床分型,其中I型6例,IIa型7例,IIb型4例。NMG-T组共14例,其中男性6例,女性8例,年龄52±11岁。胸腺病理类型包括AB型6例,B2型8例。HC组共12例,其中男性6例,女性6例,年龄53±11岁。2、免疫荧光显示AIRE、FEZF2几乎均在胸腺髓质上皮细胞内表达(如图4.2、4.3)。3、AIRE m RNA在MG-T、NMG-T、HC组中的比较(如图4.4A):MG-T组中AIRE m RNA转录相对值低于HC组(0.387(0.0714,0.9992)vs 2.492(0.5698,3.5355))及NMG-T组(0.387(0.0714,0.9992)vs 3.413(1.2394,5.5784)),差异均有显著性(P<0.05);NMG-T组与HC组AIRE m RNA转录相对值无明显差异(3.413(1.2394,5.5784)vs 2.492(0.5698,3.5355),P>0.05)。4、FEZF2 m RNA在MG-T、NMG-T、HC组中的比较(如图4.4B):MG-T组中FEZF2 m RNA转录相对值低于HC组(0.012(0.0017,0.0319)vs 0.154(0.0960,0.5904),P<0.01);MG-T组与NMG-T组以及NMG-T组与HC组FEZF2m RNA转录相对值无明显差异(0.012(0.0017,0.0319)vs 0.015(0.0089,0.5146),0.015(0.0089,0.5146)vs 0.154(0.0960,0.5904);P>0.05)。5、FOXP3 m RNA在MG-T、NMG-T、HC组中的比较(如图4.4C):MG-T组FOXP3 m RNA转录相对值低于HC组(0.064(0.0329,1.2322)vs 2.570(0.1391,8.8592),P<0.05);MG-T组与NMG-T组以及NMG-T组与HC组FOXP3 m RNA转录相对值无明显差异(0.064(0.0329,1.2322)vs 1.118(0.2366,2.8852),1.118(0.2366,2.8852)vs 2.570(0.1391,8.8592);P>0.05)。6、ACHRαm RNA在MG-T、NMG-T、HC组中的比较(如图4.4D):MG-T组中ACHRαm RNA转录相对值低于HC组(0.009(0.0012,0.0873)vs 0.146(0.0384,0.1731),P<0.05);MG-T组与NMG-T组以及NMG-T组与HC组ACHRαm RNA转录相对值无明显差异(0.009(0.0012,0.0873)vs 0.097(0.0011,4.0684),0.097(0.0011,4.0684)vs 0.146(0.0384,0.1731);P>0.05)。7、应用免疫组化方法检测不同胸腺标本中的目的蛋白:AIRE、FEZF2、FOXP3和ACHR蛋白在MG-T和NMG-T组中的比较(如图4.5):MG-T组中AIRE、FEZF2、FOXP3和ACHR蛋白百分比明显低于NMG-T组(5.585±3.294 vs10.464±4.977,7.372±3.795 vs 12.553±5.095,0.038±0.005 vs 0.044±0.006,14.843±4.347 vs 20.949±4.366;P<0.05)。结论:1、胸腺髓质上皮细胞中可检测到AIRE和FEZF2的表达。2、MG-T组胸腺瘤组织内AIRE、FEZF2 m RNA的表达均较HC降低,且AIRE m RNA较NMG-T组也降低。MG-T组胸腺瘤内FEZF2蛋白和AIRE蛋白明显低于NMG-T。提示免疫调节因子AIRE和FEZF2与MG的发病可能相关。3、MG-T组胸腺瘤组织内FOXP3 m RNA表达较HC组减低,且FOXP3蛋白较NMG-T组表达减少,提示MG-T患者胸腺内FOXP3的数量减少。4、MG-T组胸腺瘤组织内ACHRαm RNA的表达低于HC,且ACHR蛋白较NMG-T组表达减低。提示MG-T患者胸腺组织内ACHR表达量下降。