目的:近年来,不孕症的发病率日趋增高,不仅是影响人类生活和健康的医学问题,更是成为影响人类社会发展的重要问题之一。体外受精-胚胎移植(in vitro ferti1ization—embryo transfer,IVF-ET)是目前治疗不孕症的技术之一。卵母细胞的受精、胚胎以及胎儿的持续发育均受卵母细胞成熟度及质量的影响,如何改善卵母细胞的成熟度、提高胚胎质量,是目前研究的热门问题。线粒体是细胞中含量最多的细胞器,其在卵母细胞的成熟过程中发挥着极为重要的作用,而线粒体转录因子A(mitoehondrial transcriptionfactor A,TFAM)是线粒体DNA转录和复制最重要的调控因子,与线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)上特定的序列相识别并结合,促使了mtDNA的基因转录及复制,使线粒体氧化呼吸链功能的完整性得以保存,是卵母细胞得以进一步发育的能量源泉,最终保证受精和胚胎发育的的能量供应。本文研究主要目的就是测定IVF-ET患者中颗粒细胞TFAM的表达,分析其与患者的获卵率、受精率、卵裂率、卵子利用率及优质胚胎之间的关系,进一步探讨其对卵母细胞的成熟及胚胎持续发育的影响,为提高临床妊娠率,改善IVF妊娠结局提供新的方法。方法:研究对象:选择2016年3月至2016年7月在于河北医科大学第四医院生殖医学科进行体外受精-胚胎移植的不孕症患者,并且治疗方案均为GnRH-a长方案,共包括85例患者。年龄25-37周岁之间,月经周期正常,基础窦卵泡数≥7个,基础FSH值在5-10ng/ml之间。标本采集:在取卵日收集B超直视下双侧卵巢第一个穿刺的成熟卵泡(直径≥18mm)的清亮卵泡液和颗粒细胞冲洗液,将卵泡液置于的离心管2000r、10min离心,弃上清液,采集一部分颗粒细胞通过免疫细胞化学法定位TFAM基因在颗粒细胞中的表达;另一部用来进行逆转录PCR(reverse transcription-PCR,R-PCR)检测壁层颗粒细胞TFAM mRNA表达水平;第三部分采用蛋白免疫印迹法(western blot)测量TFAM蛋白的表达水平。统计学分析:计量资料以均数±标准差(means±SD)表示,计量资料比较采用Student’s t检验。两两比较采用LSD检验。计数资料釆用卡方检验。P<0.05为有统计学意义。对相关的计量资料采用Person相关系数进行相关性分析。采用SPSS 21.0统计分析软件(SPSS,Chicago,IL,USA)进行统计学分析。结果:1 TFAM在颗粒细胞中有表达,且TFAM定位于胞浆中,胞核中无表达。(图1)2颗粒细胞中均有TFAM mRNA及蛋白质的表达,二者表达的相关系数为0.225,P=0.041,二者存在直线相关关系。(图2、图3、图4)3 TFAM mRNA的表达与临床及IVF数据的关系依据三分位法将TFAM mRNA相对表达量的33%及76%百分位数将患者分为三组。低表达组:为TFAM mRNA值低于33%百分位数(TFAM m<0.3)共30例;TFAM mRNA中表达组:为TFAM mRNA值位于33%-76%百分位数之间(TFAM 0.3-0.6)共27例;TFAM mRNA高表达组:TFAM mRNA值高于76%百分位数(TFAM>0.6)共28例。三组患者间的年龄、BMI、基础FSH、基础LH、GN总量、GN天数无统计学差别。(表1)中表达组患者的的卵子利用率、2PN率、受精率及妊娠率均高于其他两组,差别有统计学意义(P<0.05)。(表2)结论:1 TFAM在人卵巢颗粒细胞胞浆内表达。2 TFAM mRNA的表达与蛋白质的表达存在直线相关关系。3 TFAM的表达存在阈值,过高或者过低均会影响线粒体的转录功能,从而影响线粒体的能量供应,进而影响卵母细胞质量、受精率和妊娠结局。TFAM中等表达的患者可以获得较好的IVF结局。