研究目的第一部分:分析老年人群体脂肪率与肌肉量变化情况及二者相关性,并讨论老年人肥胖与肌肉量减少的关系。第二部分:以常规治疗组为对照,评价盐酸曲美他嗪缓释片治疗稳定型心绞痛合并肌肉力量或功能减退老年患者的有效性和安全性。第三部分:通过构建衰老的成肌细胞模型,讨论曲美他嗪改善衰老肌肉细胞功能的可能机制。研究方法第一部分:采用回顾性研究的方法,纳入2016年2月至2017年2月在解放军总医院健康管理研究所体检的3240名老年志愿者。线性回归分析体脂肪率与全身骨骼肌质量指数的关系,logistic回归评价肥胖与老年人肌肉量下降的关系。第二部分:53名符合纳入排除标准的受试者于2018年6月至2018年11月分别在解放军总医院、郑州大学附属郑州市中心医院,随机分入试验组(常规治疗加盐酸曲美他嗪缓释片35mg bid)、对照组(常规治疗)。其中,46名受试者完成3个月随访。采用重复测量方差分析,说明加用盐酸曲美他嗪缓释片对心绞痛发作次数、利手握力、利手捏力、步速、5次坐立时间、串联站立时间的作用及药物安全性。第三部分:通过D-半乳糖诱导小鼠C2C12成肌细胞株,建立衰老成肌细胞模型。β半乳糖苷酶免疫荧光染色鉴定衰老成肌细胞;全转录组RNA测序寻找曲美他嗪干预组与衰老成肌细胞模型组、衰老成肌细胞模型组与对照组之间差异化表达的基因及组间变化趋势;通过荧光实时定量PCR以及蛋白免疫印迹,从转录及翻译水平验证差异化表达基因对应的蛋白在不同组间的表达情况;EdU法评价细胞增殖;H2DCFDA荧光探针检测细胞内总活性氧情况;明胶酶谱法评价MMP-9酶活性。研究结果第一部分:老年志愿者平均年龄为64.6岁。老年男性、女性低肌肉质量检出率分别为18.7%及43.7%。线性回归表明老年人体脂肪率与全身骨骼肌质量指数呈线性负相关(男性β=-0.990,女性β-0.989,P均<0.001)。logistic回归表明肥胖人群出现低肌肉质量比例高(男性OR=16.921,女性OR=16.826,P均<0.001)。第二部分:持续使用3个月盐酸曲美他嗪缓释片除可显著减少心绞痛发作次数外,可显著增加利手握力24.4%,利手捏力12.4%。所有入组受试者均未报道有头痛、头晕、腹痛、腹泻、消化不良、恶心、呕吐及皮疹、瘙痒、荨麻疹等不良反应。第三部分:以50mM D-半乳糖作用于C2C12成肌细胞株72h,连续诱导10代,建立衰老成肌细胞模型。测序结果表明,曲美他嗪干预(100μM)可使小鼠衰老成肌细胞 NOS3、MMP-9 基因表达呈下降趋势(Profile 18,gtrend<0.001);使 OMD(Profile 7,Q<0.001)、MyoG(Q<0.001)基因表达增加。荧光实时定量PCR以及蛋白免疫印迹结果表明,曲美他嗪可显著降低衰老成肌细胞NOS3基因的转录(P<0.001)及翻译水平(P=0.025)、MMP-9基因的翻译水平(P<0.001),显著增加OMD基因的转录(P=.008)及翻译水平(P<0.001)、MyoG基因的翻译水平(P<0.001)。EdU法结果表明,曲美他嗪干预可使衰老成肌细胞增殖能力呈上升趋势(Ptrend=0.020)。H2DCFDA荧光探针结果表明,曲美他嗪干预可使小鼠衰老成肌细胞内总活性氧水平呈下降趋势(P trend=0.011)。明胶酶谱结果表明,曲美他嗪干预可使小鼠衰老成肌细胞MMP-9活性呈下降趋势(P trend<0.001)。结论第一部分:体脂肪率与全身骨骼肌质量指数关系密切,老年肥胖人群容易出现肌肉量减少的情况。第二部分:盐酸曲美他嗪缓释片可改善老年患者的肌肉力量,对于稳定型心绞痛合并肌肉力量减退的老年患者可作为一种安全有效的治疗手段。第三部分:曲美他唤促进衰老成肌细胞再生可能与NOS3等基因有关。