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背景:胶质细胞瘤(Glioblastoma,GB)是一种颅内常见的恶性脑肿瘤,属于中枢神经系统疾病。世界卫生组将其分为四个等级,高级别的胶质瘤由于其恶性程度高,转移能力强,复发率高,所以很难彻底治愈。一般病人从开始接受治疗到死亡,基本不会超过18个月。目前治疗方法有手术摘除、放疗、化疗以及这几种方法结合。虽然目前临床上发现一些有效的治疗药物,但部分药物本身存在毒性和副作用会更加加重患者身体负担。因此,寻找一种安全有效无毒副作用的治疗药物是目前急需解决的医疗难题。白藜芦醇(Resveratrol,Res),作为天然存在于植物茎叶果实中的一种多酚类药物,不仅具有保护心血管和广谱抗菌的功效,还有抗氧化抗肿瘤的功效,无毒副作用,且能透过血脑屏障。星形胶质细胞(Astrocytes,AS)是大脑内大量存在且具有支持和保护神经元等功能的结构细胞。在肿瘤微环境中,胶质瘤周围的星形胶质细胞会分泌一些生长因子和细胞因子等对胶质瘤的生长有一定的影响。本实验目的是探讨肿瘤微环境对胶质瘤细胞系RG2细胞的影响,主要研究RG2细胞与星形胶质细胞的相互作用关系,以及白藜芦醇对二者的作用影响。方法:(1)建立共培养体系:取新生24h内的SD鼠大脑皮层细胞进行原代培养,传代纯化,与胶质瘤RG2细胞进行共培养。加入80μM的白藜芦醇处理48h。(2)应用细胞计数仪器进行细胞数量检测星形胶质细胞和RG2细胞增殖情况。(3)应用划痕实验,对贴壁细胞进行机械损伤,检测RG2细胞的迁移能力。(4)应用qRT-PCR检测星形胶质细胞中GFAP和STAT3在转录水平的变化;检测RG2细胞中MMP2、MMP7和CyclinD1在转录水平的变化。(5)应用免疫组织化学染色和免疫荧光染色观察细胞形态和检测GFAP的表达。(6)应用Western blot检测星形胶质细胞中GFAP和STAT3在蛋白水平的表达。结果:(1)星形胶质细胞和RG2细胞共培养后,二者细胞数量均增多。(2)qRT-PCR结果显示,与单独培养组相比星形胶质细胞共培养后,GFAP和STAT3相对表达量增加。RG2细胞在共培养条件下,MMP2、MMP7和CyclinD1相对表达量均增加。(3)白藜芦醇处理后,共培养体系中的星形胶质细胞和RG2细胞数量均显著减少。(4)免疫组化结果显示,肿瘤周围的星形胶质细胞有GFAP的表达。免疫荧光结果显示,共培养后,星形胶质细胞数量增多GFAP表达量增多;加入白藜芦醇后,细胞数减少,GFAP表达量也减少。(5)qRT-PCR结果显示,白藜芦醇作用48h后,星形胶质细胞GFAP和STAT3相对表达量减少。RG2细胞MMP2MMP7和CyclinD1相对表达量减少。(6)Western blot结果显示,白藜芦醇作用后,共培养星形胶质细胞GFAP和STAT3蛋白表达量减少。结论:(1)体外环境下,星形胶质细胞能够促进胶质瘤RG2细胞增殖和侵袭转移,体现在细胞数量增多,MMP2、MMP7和CyclinD1上调。(2)共培养体系中,RG2细胞可以激活周边的星形胶质细胞,表现在GFAP表达升高,细胞增多。(3)白藜芦醇不仅可以抑制胶质瘤RG2细胞的增殖,同时也可以抑制周边的星形胶质细胞的活化。(4)与其他共培养研究相比,我们采用的改良的共培养体系可以更好的模拟体内环境。