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连香树（Cercidiphyllum japonicum Sieb.et zucc.）别名山白果、云义树和五君树,是连香树科连香树属的一种古老稀有的落叶高大乔木,属东亚第三纪孑遗的木本植物之一,被列为国家二级重点保护野生植物。连香树含有丰富的化学成分,其根、茎、叶均可作药用,特别是树皮煎水饮服,对治疗感冒、痢疾有特殊疗效。目前关于连香树的研究多集中于濒危状况、培育繁殖、群落结构、遗传多样性和生态特性等方面,对其次生代谢产物的生物活性方面较少。本研究以四川省广元市旺苍县盐井河采育场的连香树叶为试验材料,提取并分析其次生代谢产物的成分,研究连香树提取物的体外抗氧化活性、对人肝癌SMMC-7721细胞抗肿瘤活性及其作用机制,为进一步更好的开发利用奠定基础。研究内容具体如下:（1）连香树次生代谢物的提取及成分分析研究通过水浸提法、超声波提取法和水蒸气蒸馏法提取连香树叶片中的次生代谢物得连香树水提物、连香树超声波萃取物和连香树精油。采用超高效液相色谱-飞行时间质谱联用技术（UPLC-TOF/MS）分析连香树水提物和超声萃取物所含成分,经化合物碎片分析比对鉴别出连香树水提物的三个黄酮类物质,即山萘酚,苜蓿素,异槲皮苷;超声萃取物的三个黄酮类物质,即山萘酚,柚皮素,槲皮素3-O-β-D-葡萄糖苷。采用气相色谱质谱联用技术（GC-MS）分析连香树精油的成分,主要含有桉树醇,α,α-4-三甲基-3-环己烯-1-甲醇,4-甲基-1-（1-甲基乙基）-3-环己烯-1-醇,邻苯二甲酸,异丁基辛酯等化合物。（2）连香树提取物体外抗氧化活性的研究以连香树水提物、超声萃取物和连香树精油为试验材料,通过清除羟自由基、DPPH自由基、超氧阴离子及还原三价铁离子四个指标来综合评价连香树提取物的体外抗氧化活性。结果表明连香树水提物和超声萃取物均有较强的清除羟自由基、DPPH自由基、超氧阴离子及还原三价铁离子的能力。抗氧化的作用随提取物浓度的增大而增强,其中清除超氧阴离子(IC50值分别为0.083 mg/mL和0.002 mg/mL)的能力强于阳性对照Vc(IC50值为0.238 mg/mL)且铁离子还原力的IC50值(水提物的IC50值为0.014 mg/mL;超声萃取物的IC50值为0.001 mg/mL)相对较小,说明其总抗氧化活性较强,表明二者具有良好的体外抗氧化活性。对连香树精油来说,随着浓度的升高,对三种自由基的清除效果不明显,还原力也较弱,在p=0.05水平上差异均不显著,无统计学意义,表明其抗氧化活性较弱。（3）连香树提取物对人肝癌SMMC-7721细胞抗肿瘤活性及机制的研究通过MTT法测定连香树提取物对人肝癌SMMC-7721细胞活力的影响。结果表明连香树水提物和超声萃取物对人肝癌SMMC-7721细胞的细胞毒性作用较弱,且细胞抑制率不随浓度的升高而升高;连香树精油则表现出显著的细胞毒性作用,所以选用连香树精油进行后续实验。连香树精油处理人肝癌SMMC-7721细胞12 h、24 h、48 h后,随着浓度的升高细胞抑制率也随之逐渐增大,其IC50值分别为0.108mg/mL,0.104 mg/mL,0.132 mg/mL。其中处理24 h时的IC50值最小,选择24 h作为后续试验的处理时间。进一步通过显微镜观察连香树精油处理后SMMC-7721细胞的形态发现,随着浓度增大,细胞形态由立体的梭形逐渐皱缩变圆、破裂,呈扁平的不规则形。用流式细胞仪检测连香树精油对人肝癌SMMC-7721细胞周期和凋亡率的影响。周期结果表明,连香树精油作用于SMMC-7721细胞后,通过阻滞部分G2/M期的细胞抑制细胞增殖。随连香树精油浓度的升高,G2/M期的细胞比例由7.14%升高至11.14%;凋亡率结果表明连香树精油诱导了SMMC-7721细胞凋亡,细胞凋亡率呈剂量依赖性升高。当处理浓度为0.6 mg/mL时,连香树精油极显著性促进人肝癌SMMC-7721细胞发生凋亡,细胞凋亡率（早凋+晚凋）为20.58%。进一步通过AO/EB染色和透射电镜观察凋亡细胞,AO/EB染色观察到随着连香树精油浓度的升高,呈桔红色或红色荧光的凋亡细胞数逐渐增多。透射电镜也观察到细胞内核染色质散乱分布,出现许多空泡及凋亡小体等凋亡特征。JC-1线粒体膜电位试剂检测盒检测发现连香树精油处理人肝癌SMMC-7721细胞后,随着精油浓度的升高,线粒体膜电位比值明显下降,且呈剂量依赖性。透射电镜和Western Blot检测连香树精油对人肝癌SMMC-7721细胞自噬的影响。透射电镜观察到细胞出现许多明显的双层膜结构或者包裹着需要降解的细胞器的自噬体;Western Blot检测结果发现细胞内LC3-Ⅱ蛋白的大量积累,Beclin-1的蛋白水平明显上调,二者均表明连香树精油诱导了人肝癌SMMC-7721细胞发生较高水平的自噬。深入研究连香树精油诱导的自噬在凋亡中扮演的角色,加入自噬抑制剂氯喹后,测定SMMC-7721细胞中Bcl-2抗凋亡蛋白的水平发现,与对照组相比,Bcl-2抗凋亡蛋白随连香树精油浓度的增大而明显下调,表明连香树精油处理人肝癌SMMC-7721细胞后诱导的自噬作为一种保护机制存在。综上所述,本研究分析了连香树提取物的成分并测定了其抗氧化活性,阐明了其抗肿瘤机制。发现连香树水提物和超声萃取物具有良好的抗氧化活性;连香树精油能够诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡和自噬,还可以通过抑制自噬过程促进精油对SMMC-7721细胞的凋亡作用。